Escherichia coli O157:H7 aisladas de ganado argentino muestran ensayos funcionales con características de hipervirulencia

NATALIA AMIGO; MARIANO LARZÁBAL; ELSA C MERCADO; ANGEL A. CATALDI

Buenos Aires

Congreso; XIII Congreso Argentino de Microbiología 2013; 2013

Escherichia coli O157:H7 es causante de diarrea severa y síndrome urémico hemolítico (SUH), el cual afecta principalmente a niños menores de 5 años; siendo Argentina el país de mayor incidencia de SUH del mundo. El ganado bovino es su principal reservorio y fuente de infección. Sus mayores atributos de virulencia son la toxina Shiga, de varios subtipos, siendo cualquiera de estas necesaria para el desarrollo del SUH; y el Sistema de Secreción de tipo III (SSTT), a través del cual la bacteria trasloca proteínas secretoras y efectoras. A partir del uso de genotipado por SNPs en EEUU, aislamientos de Escherichia coli O157:H7 fueron agrupados en nueve clados filogenéticos distintos. Las cepas de clado 8 fueron más frecuentemente asociadas a casos de SUH. En Argentina nuestro grupo ha identificado cepas de clado 8 y de clados filogenéticos nuevos en bovinos de Santa Fe, La Pampa y Buenos Aires. Objetivo: Determinar en cepas de Escherichia coli O157:H7 aisladas de ganado bovino argentino, su potencial patogénico; en ensayos de hemolisis, de citotoxicidad en células Vero, de adherencia en células epiteliales y de patogenicidad en modelo murino. En este trabajo se estudiaron 9 aislamientos de Escherichia coli O157:H7, aisladas de ganado bovino argentino. Anteriormente se les había determinado el clado por SNPs typing, utilizando 32 SNPs y/o 4 SNPs. Se determinó la actividad hemolítica del SSTT en eritrocitos ovinos. Se determinó la DC50 de los sobrenadantes de cultivos en células Vero. Se analizó la adherencia en monocapas de celulas Caco-2, Hep-2 y HeLa. Se determinó letalidad provocada por las cepas en ratones BALB/c y se analizaron los valores de urea en suero de los mismos. De los 9 aislamientos analizados, seis fueron clasificados como clado 8 según 4 SNPs y de estos, dos fueron confirmadas como clado 8 (Rafaela II y 9.1 Anguil) por un método más específico, según 32 SNPs. Los otros, sin embargo, presentan perfiles de SNPs no descriptos previamente. Tres de los aislamientos (7.1 Anguil, Rafaela II y N 7562) presentaron alta actividad hemolítica. Cuatro aislamientos (7.1 Anguil, Rafaela II, Balcarce 14.2 y Vac 07) presentaron elevada DC50 (mayor a 10-4). Las cepas Balcarce 14.2 y Balcarce 24.2 presentaron elevada adherencia en células Caco-2 y HeLa, mientras que las cepas N 7562 y 9.1 Anguil mostraron elevada adherencia en células Hep-2. La cepa 7.1 Anguil provoco un 60% de letalidad en BALB/c y elevada urea en suero (1,095 g/l). Estos resultados muestran que el ganado argentino es reservorio de Escherichia coli O157:H7 de clado 8, el linaje asociado con la enfermedad más severa en el humano, así como de cepas de clados filogenéticos únicos que mostraron ser potencialmente más virulentas en los ensayos funcionales realizados. Estos aislamientos de ganado bovino argentino mostraron perfiles de virulencia de patógenos de alto riesgo y alertan sobre el rol epidemiológico del ganado como fuente de infecciones severas por Escherichia coli O157:H7 en humanos.