EL SISTEMA DE SECRECIÓN DE TIPO 6 PERMITE LA SUPERVIVENCIA DE Escherichia coli O157:H7 EN MACRÓFAGOS MURINOS

RIVIERE, NAHUEL A.; DA SILVA, WANDERSON MARQUES; A CATALDI; LARZABAL MARIANO,

Simposio; 1º Simposio Argentino de Escherichia coli productor de toxina Shiga responsable del Síndrome Urémico Hemolítico; 2022

El sistema de secreción de tipo 6 (SST6) se ha propagado ampliamente en bacterias Gram negativas como Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) O157:H7. Este sistema de secreción atraviesa la doble membrana bacteriana permitiendo que los factores de virulencia se translocan directamente desde el citoplasma de la bacteria hacia la célula blanco. El SST6 posee 13 componentes esenciales conservados, entre ellos se encuentra la proteína TssB (componente de la cola retráctil). Durante la infección, EHEC O157:H7 coloniza regiones intestinales asociadas a los folículos donde se encuentran componentes del sistema inmune innato, principalmente macrófagos. Estos macrófagos fagocitan las bacterias EHEC O157:H7 adheridas al epitelio e inducen la producción y liberación de especies reactivas de oxígeno (ROS) para eliminarlas. Estudios recientes demostraron que EHEC es capaz de sobrevivir y de replicar dentro de los macrófagos luego de 24 hs de ser fagocitada. El objetivo de este trabajo consistió en evaluar si el SST6 de la cepa EHEC O157:H7 permite la supervivencia intracelular en macrófagos murinos. Para ello se obtuvo una cepa EHEC O157:H7 mutante para el gen tssB por la metodología de edición génica CRISPR/Cas9. Se realizaron ensayos de supervivencia donde se infectaron monocapas de macrófagos murinos (RAW 264.7) con las cepas EHEC O157:H7 salvaje y ΔtssB (MOI 100). Luego de 30 minutos de infección, los macrófagos fueron lavados tres veces con PBS y posteriormente fue agregado medio DMEM fresco conteniendo 100 µg/ml del antibiótico gentamicina para eliminar las bacterias no fagocitadas. La placa se incubó durante 2 y 24 hs a 37 °C en una atmósfera de 5% de CO2. Luego los macrófagos fueron lisados con una solución de SDS al 0.025% para liberar las bacterias internalizadas y mediante recuento de UFC a las 2 y 24 hs post infección se calculó el porcentaje de sobrevida. Los ensayos se realizaron por triplicado y para la significancia estadística (p