IDENTIFICACIÓN DE UN SISTEMA DE SECRECIÓN DE TIPO 6 ANTIBACTERIANO Y CARACTERIZACIÓN BIOINFORMÁTICA DE POTENCIALES EFECTORES EN Escherichia coli PRODUCTORA DE TOXINA SHIGA

RIVIERE, NAHUEL; DA SILVA, WANDERSON MARQUES; A CATALDI; LARZABAL MARIANO,

Simposio; 1er Simposio Argentino de Escherichia coli productor de toxina Shiga responsable del Síndrome Urémico Hemolítico; 2022

Escherichia coli productoras de toxina Shiga (STEC) son patógenos intestinales transmitidos por alimentos que pueden causar síndrome urémico hemolítico (SUH) en humanos, siendo Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) O157:H7 el serotipo más frecuente asociado con SUH. La cepa STEC O22:H8 (nombrada cepa 154) es un serotipo aislado de ganado bovino en Argentina. Estudios preliminares demostraron que el ganado bovino colonizado por la cepa STEC O22:H8 154 impidió la colonización de EHEC O157:H7 en la juntura recto-anal bovina. Uno de los mecanismos de virulencia más versátiles involucrado en la entrega de efectores es el sistema de secreción de tipo 6 (SST6). El SST6 1 transloca efectores antibacterianos con actividades citotóxicas durante la competencia inter bacteriana en bacterias Gram negativas. Se realizó la secuenciación completa del genoma de la cepa STEC O22:H8 154 con la tecnología PacBio y se analizaron las secuencias con la plataforma Bastion. 6 para predecir potenciales efectores del SST6. Se utilizaron las bases de datos pfam y Batch Web CD Search-tool para la identificación de dominios catalíticos de los genes candidatos y los servidores Phyre 2 y HHPRED para obtener una predicción de la estructura 3D de las secuencias proteicas. Se determinó mediante ensayos de competencia in vitro la actividad bactericida de la cepa STEC O22:H8 154. Para ello se hicieron co-cultivos de la cepa STEC O22:H8 154 (predador) con O157:H7 (pCRISPR Kmr) (presa) ó DH5- α (pCRISPR Kmr) (presa) en distintas proporciones de predador: presa (0,5:1, 1:1 y 3:1). Las mezclas fueron crecidas en LB agar por 16 hs a 37°C, luego lavadas con PBS para hacer diluciones seriadas y finalmente se sembraron en LB agar conteniendo kanamicina (50 μg/ml) seleccionando de esta manera las cepas presas resistentes a kanamicina. Los ensayos fueron realizados por triplicado y para la significancia estadística (p