ANÁLISIS PARCIAL DE LA RELACIÓN DEL REGULADOR fur CON PROCESOS QUE CONTRIBUYEN A LA PATOGÉNESIS DE Escherichia coli O157:H7

IANNELLI DN; LARZABAL MARIANO,; A. CATALDI; DA SILVA, WANDERSON MARQUES

Simposio; 1º Simposio Argentino de Escherichia coli productor de toxina Shiga responsable del Síndrome Urémico Hemolítico; 2022

Escherichia coli enterohemorrágica (EHEC) O157:H7 es un patógeno zoonótico capaz de causar diarrea severa y síndrome urémico hemolítico (SUH) en humanos. Estudios han demostrado que la expresión de estos factores de virulencia y procesos involucrado en la patogénesis de E. coli O157:H7 está directamente relacionada a diferentes estímulos ambientales (temperatura, cationes, pH y osmolaridad) y nutricionales. Ferric uptake regulator (fur) es un regulador transcripcional bacteriano involucrado en la regulación de la adquisición y metabolismo del hierro. Además de eso, fur regula directa o indirectamente genes relacionados a diferentes procesos biológicos. Estudios han demostrado que tanto Fur como el hierro juegan un rol importante en la fisiología y patogénesis de diferentes bacterias- Con respecto a E. coli O157:H7 todavía hay poco conocimiento de la asociación del fur con su patogénesis. Por lo tanto, el presente trabajo tiene como objetivo evaluar el rol de fur en los procesos que están involucrados con la patofisiología de E. coli O157:H7. Para llevar a cabo este estudio primero se generó una cepa de E. coli O157:H7 (Rafaela II) defectiva para el gen fur utilizando el sistema lambda red. Luego se evaluó el perfil de crecimiento de las cepas Rafaela II (wt) y mutante Δfur en medio de cultivo Luria bertani (LB) ante distintas biodisponibilidades de hierro, utilizando diferentes concentraciones (200 μM, 250 μM y 300 μM) del quelante de hierro 2,2′-Bipyridyl (BPD) para limitar la disponibilidad de este metal en el medio de cultivo. En este ensayo se observó una disminución del perfil de crecimiento de la cepa Δfur tanto en la condición control (LB) y ante la limitación de la disponibilidad del hierro en el cultivo con relación a la cepa wt. Posteriormente, en un ensayo de supervivencia en macrófagos murinos (RAW264.7), se observó luego de 2 y 24 hs una diferencia significativa entre la cepa wt y mutante, mostrando un mayor UFC/ml en wt que en Δfur. A su vez, se realizó un ensayo de resistencia a el estrés ácido en medio LB con un pH de 5 y 2, donde se observó un decrecimiento de la supervivencia en un 5% a pH 5 y un 15% a pH 2 de Δfur ante wt. Estos resultados preliminares muestran que el fur es requerido para el correcto crecimiento de E. coli O157:H7 principalmente en condiciones limitadas de hierro, y para resistir la acción de macrófagos. Además, estos resultados sugieren que el gen fur podría estar participando de mecanismos directos o indirectos en la regulación de genes necesarios para la supervivencia de E. coli O157:H7 dentro de los macrófagos.