BIOTECNOLOGÍA APLICADA A LA PRODUCCIÓN LOCAL DE ANTIVENENO PARA ENFRENTAR EL ERUCISMO POR LONOMIA OBLIQUA

JOAQUÍN MANUEL BIREMBAUM; LUCIA MOURA; LUCIANO MONTERO; JOAQUIN POODTS; MARÍA SOL RODRIGUEZ; M GRITTI; LEONARDO GABRIEL ALONSO; ALEXANDRA MARISA TARGOVNIK; MARIA PEICHOTO; MARIA VICTORIA MIRANDA

Congreso; ABA 74° Congreso Argentino de Bioquímica; 2023

INTRODUCCIÓNLos accidentes provocados por orugas de Lonomia obliqua - lepidóptero venenoso presente en el nordesteargentino- representan un problema sanitario creciente y preocupante. El único antídoto disponible en la región esfabricado por el Instituto Butantan (Brasil) y consiste en anticuerpos policlonales provenientes de equinoshiperinmunizados con el veneno de las cerdas de las orugas. El veneno contiene dos componentes proteicosdenominados activador del factor X (Losac, Ls) y activador de protrombina (Lopap, Lp).Nuestra hipótesis de trabajo consiste en que sería factible reemplazar el veneno completo por Ls y Lp producidaspor métodos biotecnológicos para aplicar como inmunógenos en la fabricación del antiveneno.OBJETIVOS DEL ESTUDIO-Utilizar el sistema baculovirus-larvas de insectos para la producción biotecnológica de Ls y Lp. -Purificar ycaracterizar Ls y Lp recombinantes.MATERIALES Y MÉTODOSLas secuencias genéticas de Ls y Lp se clonaron tras el promotor poliedrina, el péptido señal baculoviral gp64 y seadicionó una etiqueta de histidinas para su purificación por Cromatografìa de Afinidad de Iones MetálicosInmovilizados (IMAC) y la detección por Western Blot. Los baculovirus basados en Autographa californica(rAcMNPV-Lp y rAcMNPV-Ls) fueron usados para infectar larvas de Rachiplusia nu y Spodoptera frugiperda. Seprocesaron lotes de entre 35 y 50 larvas de cada especie. Lp y Ls recombinantes (rLp; rLs) se purificaron a partir delos extractos larvales por IMAC utilizando Ni como ligando. Todas las fracciones cromatográficas fueron analizadaspor SDS-PAGE y Western Blot.Se evaluó el grado de pureza obtenido en cada caso por RP-HPLC y MALDI-TOF MS. Se ensayó además elreconocimiento de las mismas con el suero del Inst. Butantan.RESULTADOS OBTENIDOSrLp y rLs fueron expresadas con actividad biológica y purificadas a partir de lotes de larvas de R. nu y S. frugiperda.Los mejores rendimientos obtenidos luego de la purificación fueron para rLp de 348 ug rLp/g larva R. nu y para rLsde 87,1 ug /g S. frugiperda.rLp y rLs fueron inmunológicamente activas y además eficientemente reconocidas por el antiveneno generado enButantan según Western Blot.CONCLUSIONESSe desarrolló un método biotecnológico innovador, escalable y sustentable para producir las principales toxinas delveneno de L. obliqua en larvas R. nu y S. frugiperda con alto grado de pureza y rendimiento. Los resultados obtenidosson alentadores y sientan las bases para la aplicación de estas toxinas recombinantes como inmunógenos enreemplazo del veneno para la producción local del antídoto.