Vías intracelulares involucradas en el mecanismo de acción de la dopamina en el túbulo proximal renal: activación de la PKCa por el ácido 20-hidroxieicosatetraenoico (20-HETE)

ACQUIER, A.; KIRCHHEIMER, C.; MENDEZ, C.F.; NOWICKI, S.

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2006

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Reportamos previamente la activación de la isoforma z de la Proteína Kinasa C (PKCz) por el ácido 20-hidroxieicosatetraenoico (20-HETE) en la vía de transducción de señales de la dopamina (DA) en el túbulo proximal renal. Dado que esta isoforma es independiente de calcio y que la activación de receptores dopaminérgicos está asociada, entre otros, al aumento del calcio intracelular, nos propusimos estudiar si en el túbulo proximal la DA activa a la PKCa (una isoforma dependiente de calcio) y si el 20HETE interviene en este proceso. La cativación de la PKCa se evaluó mediante el estudio de los cambios en su distribución intracelular. Se utilizaron ratas controles y tratadas con 1-aminobenzotriazol (ABT, 50 mg/kg, i.p.), un inhibidor selectivo en el riñón del citocromo P4504A, responsable de la producción de 20HETE. Se aislaron células de túbulo proximal, se incubaron con DA (10 mM) o 20HETE (1 mM), se separaron las fracciones soluble (citosol) y particulada (membranas) por ultracentrifugación, y se determinó el contenido de PKCa pro Western blot. Tato la DA como el 20HETE promovieron la redistribución de PKCa desde la fracción soluble ala fracción particulada (cociente membrana/citosol: basal 0,51 ± 0,07; DA 0,79 ± 0,07* y 20HETE 0,87 ± 0,09*). El tratamiento con ABT inhibió el efecto de la DA, pero no el del 20HETE sobre la redistribución de PKCa (cociente membrana/citosol: basal 0,50 ± 0,07; DA 0,49 ± 0,15 y 20HETE 0,79 ± 0,08*). *p<0,05 vs. basal. Concomitantemente, hemos observado que el tratamiento con ABT atenúa el aumento del estado de fosforilación de la Na+,K+-ATPasa en respuesta a la estimulación por dopmaina en células de túbulo proximal. Nuestros resultados sugieren que en respuesta al estímulo dopaminérgico el 20HETE promueve la redistribución de la PKCa del citosol hacia la fracción de membrana. Este evento facilitaría la fosforiación de la Na+,K+-ATPasa por esta kinasa, un paso necesario para la inhibición de la actividad de la bomba.