Dopamina activa la quinasa ERK 1/2 por un mecanismo mediado por especies reactivas del oxígeno

ACQUIER A.; BRION L.; GOROSTIZAGA A.; PAZ C.; MENDEZ C.F.

Mar del Plata

Congreso; LIII Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2008

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

En el túbulo proximal renal, la dopamina (DA) regula la actividad de la Na+,K+-ATPasa por un mecanismo en el que participan la proteína quinasa C y metabolitos hidroxilados del ácido araquidónico (AA). La quinasa de señales extracelulares tipo 1 y 2, ERK 1/2, (ERK) está involucrada en la regulación de la actividad de la fosfolipasa A2 que controla la liberación de AA para su biotransformación. En este sistema, el metabolismo de DA genera especies reactivas del oxígeno (ROS), que podrían activar ERK. Por lo tanto, el objetivo de este trabajo fue determinar si ERK participa de la vía de señalización activada por DA e investigar el tipo de receptor involucrado y la participación de ROS en el proceso. Se utilizaron células de túbulo proximal de la línea OK (opossum kidney) estimuladas con DA en presencia o ausencia del compuesto antioxidante N-acetilcisteina (NAC 1 mM), o de agonistas selectivos D1, SKF-38393 (SKF, 300 nM) o D2, PPHT (500 nM). La activación de ERK se determinó a través de la detección de la forma fosforilada de la quinasa (P-ERK) por Western blot, utilizando anticuerpos específicos contra P-ERK y ERK total. DA promovió la activación de ERK en forma dependiente de la concentración (0,1 a 10 mM) y del tiempo (entre 2,5 y 30 min) con un máximo a los 10 min de estimulación. La mínima concentración que produce máximos niveles de P-ERK (1 mM) produjo una activación de 5 veces con respecto al control a los 10 min Ninguno de los agonistas selectivos promovió la fosforilación de ERK, sugiriendo que la acción de DA es dependiente de ambos tipos de receptores. NAC redujo parcialmente el efecto de la DA sobre ERK y también la fosforilación de ERK mediada por un dador de ROS. Nuestros resultados sugieren que DA promueve la activación de ERK a través de la activación de receptores dopaminérgicos de tipo D1 y D2 en un proceso del que participan ROS.