ERK1/2 promueve la fosforilación y activación de la fosfolipasa A2 en células de túbulo proximal renal

ACQUIER, A.; GOROSTIZAGA, A.; MORI SEQUEIROS GARCIA, M.; PAZ, C.; MENDEZ, C.F.

Mar del Plata

Congreso; LIX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2014

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Hemos reportado que en células de túbulo proximal, dopamina (DA) regula la actividad de  ERK1/2 con la participación de PKC y de especies reactivas del oxígeno. Dado que la fosforilación de fosfolipasa A2 (FLA2) incrementa su actividad enzimática intrínseca, nuestro objetivo fue analizar la regulación de la actividad de FLA2 por DA y el rol de ERK1/2 en la misma en células de la línea OK (opossum kidney). El análisis por RT-PCR reveló la expresión mayoritaria de la isoforma IVA de FLA2. La determinación de la actividad de la enzima por fluorometría indicó que DA (10-6M) promueve la activación de FLA2en forma dependiente del tiempo, con un máximo a los 15 min (control: 2,58±0,04; DA: 3,46±0,10 U/mg, p<0,01) y que la preincubación con los inhibidores de la activación de ERK1/2 (PD98059, 5x10-5M) o de PKC (Ro-318220, 10-8M) o con el antioxidante N-acetilcisteína (10-3M) anula el efecto de DA sobre la FLA2. Estos resultados se confirmaron mediante western blot con un anticuerpo anti-fosfo-FLA2. MKP-1 es una fosfatasa que desfosforila a ERK1/2, inactivándola. En células transfectadas para la sobreexpresión de MKP-1, se observó una reducción en el efecto de DA sobre ERK1/2 y FLA2, confirmando el rol de ERK1/2 en la fosforilación y activación de FLA2. Se analizó la localización subcelular de FLA2 IVA por microscopía de epifluorescencia y confocal, registrándose un incremento en la intensidad de la señal de fosfo-FLA2 a nivel nuclear y perinuclear. El ácido araquidónico (AA) liberado por la FLA2 puede ser metabolizado por las enzimas ciclooxigenasa-2 (COX-2) y 5-lipooxigenasa (5-LOX). DA incrementó la expresión de ambas proteínas en forma dependiente del tiempo, efecto evidente a los 30 min y máximo a las 2 horas. Nuestros resultados demuestran la activación de FLA2 por DA y su translocación al núcleo por un mecanismo mediado por ERK1/2 que conduciría la liberación de AA y su metabolización por COX-2 y 5-LOX.