La dopamina induce cambios en la distribución subcelular de la PKCz en células de túbulo proximal. Participación del ácido 20-hidroxieicosatetraenoico, un metabolito del ácido araquidónico

KIRCHHEIMER, C.; ACQUIER, A..; MENDEZ, C.F.; NOWICKI, S.

Mar del Plata, Argentina

Congreso; L Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2005

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Reportamos previamente que el ácido 20 hidroxieicosatetraenoico (20HETE) y la isoforma z de la Proteína Kinasa C (PKCz) están involucrados en la regulación de la actividad de la Na+,K+-ATPasa renal por la dopamina (DA). La PKCz es una isoforma atípica, cuya activación se relaciona con cambios en su distribución subcelular y es independiente del calcio y del diacilglicerol. El objetivo de este trabajo fue analizar si la DA modifica la localización subcelular de la PKCz en el túbulo proximal, y si el 20HETE interviene en este proceso. Se utilizaron ratas controles y tratadas con 1-aminobenzotriazol (ABT, 50 mg/kg, i.p.), un inhibidor selectivo en el riñón del citocromo P4504A, responsable de la producción de 20HETE. Se aislaron células de túbulo proximal, se incubaron con DA (10 mM) ó 20HETE (1 mM), se separaron las fracciones soluble (citosol) y particulada (membranas) por ultracentrifugación, y se determinó el contenido de PKCz por Western blot. La producción de 20HETE se determinó por TLC y radioautografía de los productos de incubación de lisados de células proximales con [14C] ácido araquidónico (AA) y NADPH. Tanto la DA como el 20HETE disminuyeron el contenido de PKCz en membranas y lo aumentaron en el citosol (contenido de PKCz en membranas y citosol, expresado en %: basal  47 ± 8 y 53 ± 8; DA 33,5 ± 9,5 y 66 ± 9,5; 20HETE 25 ± 14 y 75 ± 14). El tratamiento con ABT inhibió el efecto de la DA, pero no del 20HETE (contenido de PKCz en membranas y citosol, expresado en %: basal  25 ± 10 y 75 ± 10; DA 20 ± 7 y 80 ± 7; 20HETE 7 ± 3 y 93 ± 3). La incubación de lisados celulares con [14C]AA resultó en la producción de diversos metabolitos del AA, entre los cuales se identificó al 20HETE. La producción de 20HETE fue inhibida selectivamente por el ABT. Se sugiere que el 20HETE participa en la vía de transducción de señales de la dopamina en el túbulo proximal, mediando cambios en la distribución subcelular de la PKCz.