La activacion de la fosfolipasa A2 por dopamina involucra la generacion de ROS y la activacion de ERK1/2 en celulas de tubulo proximal renal

ACQUIER, A.; MORI SEQUEIROS GARCIA, M.; GOROSTIZAGA, A.; MARCHIONE, V.; GOMEZ, N.; PAZ, C.; MENDEZ, C.F.

Mar del Plata

Congreso; LVII Reunión científica anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2012

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

Reportamos previamente la participación de la proetína kinasa C (PKC) y de las especies reactivas del oxígeno (ROS) en la activación de la kinasa de señales extracelulares 1 y 2 (ERK1/2) y del factor nuclear kB (NF-kB) en la vía de transducción de señales de la dopamina (DA) en células de túbulo proximal renal. Dado que en diversos sistemas la actividad de la fosfolipasa A2 (FLA2) es regulada por fosforilación por ERK1/2, nuestro objetivo fue investigar el rol de esta kinasa en la regulación de la actividad de la FLA2 por la DA. Se utilizaron células de la línea OK (opossum kidney) y se estudió la expresión de las isoformas de la familia IV de la FLA2 por RT-PCR semicuantitativa, la localización subcelular de FLA2 IV A por microscopía de fluorescencia, la actividad de la enzima por fluorimetría y la liberación de ácido araquidónico (AA) por cromatografía en capa delgada (TLC). El análisis por PCR demostró que las células OK expresan en forma mayoritaria la isoforma IV A de la FLA2 en favor de la forma IV B, no registrándose expresión de la isoenzima IV C. DA (10-6M) promovió la activación de la FLA2 en forma dependiente del tiempo, con un máximo a los 15 min de estimulación (control: 2,58±0,04; DA 3,46±0,10 U/mg, p<0,01) y su translocación desde el citosol a las regiones nuclear y perinuclear. La preincubación de las células con los inhibidores de la activación de ERK1/2 (PD98059, 5x10-5M) o de PKC (Ro-318220, 10-8M), o con el antioxidante N-acetilcisteína (NAC, 10-3M) abolió el efecto de DA sobre la FLA2. DA promovió también la liberación de AA al medio de cultivo, un efecto que fue abolido en presencia del inhibidor de FLA2, AACOCF3 (control: 2400±170 vs. DA: 5200±260, p<0,01). Nuestros resultados demuestran la activación de FLA2 por DA, por un mecanismo que involucra la generación de ROS y la participación de ERK1/2.