Participación de especies reactivas del oxígeno en la vía de transducción de señales de dopamina en células de túbulo proximal de riñón

ACQUIER, A.; TOME, J.; MORI SEQUEIROS GARCIA, M.; GÓMEZ, N.V.; GOROSTIZAGA, A.; PAZ, C.; MENDEZ, C.F.

Mar del Plata, Provincia de Buenos Aires

Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica; 2011

Sociedad Argentina de Investigación Clínica

En células de túbulo proximal de riñón, dopamina (DA) regula la actividad de la Na+,K+-ATPasa con la participación de la proteína kinasa C (PKC) y de la kinasa ERK1/2. Dado que la reacción de metabolización de DA por acción de la monoaminooxidasa genera H2O2 y que la activación de ERK1/2 por DA se reduce en presencia del antioxidante N-acetilcisteína, nuestro objetivo fue investigar si DA modifica los niveles intracelulares de especies reactivas del oxígeno (ROS) y si estas modificaciones generan una respuesta de los mecanismos de defensa antioxidante. Se utilizaron células de la línea OK (opossum kidney) y los niveles de ROS se midieron utilizando el sensor 2’7’-diclorofluoresceína, la actividad de superóxido dismutasa (SOD) y de catalasa (CAT) espectrofotométricamente y la de NFkB por luminiscencia luego de la transfección de las células con un plásmido conteniendo tres copias de la secuencia kB unidas al ADNc de luciferasa. DA (10-6M) produjo un aumento de los niveles de ROS con un máximo alrededor de 90 seg de incubación y un efecto dependiente de la concentración (p< 0,05) entre 10-12 y 10-8M. La preincubación de las células con rotenona (10-6M) o Ro-318220 (10-8M) abolió el efecto de DA mientras que PD98059 (5x10-5 M) no modificó el efecto. DA (10-6M, 15 min) produjo un aumento significativo de la actividad de SOD (control: 62±5; DA: 83±8 U/mg) pero no modificó la actividad de CAT (control: 480±10; DA: 510±40 nmol H2O2/mg/min). DA (10-6M) produjo también un aumento significativo y dependiente del tiempo (p<0,01) de la actividad de NFkB, que fue abolido por la preincubación de las células con rotenona o con PD98059. Nuestros resultados demuestran que la incubación de células OK con DA resulta en una elevación de los niveles intracelulares de ROS generados a nivel mitocondrial por un mecanismo que involucra la acción de la PKC, en un incremento de la actividad de SOD y del factor de transcripción NFkB en cuya activación participa ERK1/2.