Estudio de los genes de la vía biosintética de aflatoxinas y ácido ciclopiazónico en cepas de Aspergillus flavus no aflatoxicogénicas en Argentina.

ALANIZ ZANON, M. S.; BARROS, G.; COTTY, P.J.; CHULZE, S.

Río Cuarto

Congreso; VII Congreso Latinoamericano de Micotoxicología; 2013

Universidad Nacional de Río Cuarto. Sociedad Latinoamericana de Micotoxicología

La contaminación a campo del maní con aflatoxinas, producidas por Aspergillus de la sección Flavi, es una problemática actual de gran preocupación, y una de las estrategias en auge tendiente a prevenir tal contaminación es el control biológico. Esta estrategia implica la adición al suelo de cepas no aflatoxicogénicas que permitan desplazar a las cepas aflatoxicogénicas nativas. Con el objetivo de caracterizar genética y molecularmente cepas potencialmente útiles para el biocontrol, se trabajó con 50 cepas de Aspergillus de la sección Flavi aisladas de diferentes regiones de la provincia de Córdoba, a las cuales se les había determinado su condición no-aflatoxicogénica en estudios anteriores. Una vez aislado el ADN de cada una de estas cepas se amplificó el gen de la calmodulina, siguiendo la metodología propuesta por Probst et al. (2012). Basados en el análisis de las secuencia de realizó un análisis preliminar de máxima parsimonia a partir del cual se determinó que una de las cepas se pudo identificar como pertenecía a la especie A. parasiticus, otras dos a A. caelatus, mientras que las 47 restantes fueron identificadas como A. flavus. Posteriormente, se llevó a cabo una PCR múltiple para la amplificación de 4 genes de la vía de síntesis de aflatoxinas en las 47 cepas pertenecientes a la especie A. flavus, de acuerdo a Criseo et al. (2008). Se observaron 6 patrones de bandas diferentes. El 56% de las cepas mostró la amplificación de los 4 genes analizados, siendo el patrón de bandas más prevalente, seguido de un 13% que no amplificó ninguno de los fragmentos. Este resultado no permitió distinguir cepas productoras de aquellas no productoras de aflatoxinas. Considerándose necesario un estudio molecular más profundo, se realizó otra PCR múltiple para caracterizar los clusters de genes asociados a la vía de síntesis de aflatoxinas y ácido ciclopiazónico (ACP). Esta metodología (aún no publicada) consistió en 4 paneles diferentes, con 7-9 pares de cebadores de cada uno de ellos, los dos primeros correspondientes al cluster de aflatoxinas y los otros dos al de ácido ciclopiazónico. Para el cluster de aflatoxinas, se determinó 7 patrones de bandas diferentes, y la mayoría de las cepas (68%) amplificó la totalidad de los genes evaluados, no existiendo relación alguna con la producción de esta toxina evaluada químicamente en ensayos previos. Respecto al cluster de ACP, se encontró un total de 28 patrones distintos, revelando la ausencia de al menos uno de los genes en todas las cepas analizadas. Sin embargo, el análisis químico de estudios anteriores reveló que sólo 11 de las 47 cepas eran no productoras de ACP. Este estudio mostró una alta variabilidad entre las cepas de esta población, aunque la presencia/ausencia de los marcadores estudiados no presenta relación con la producción/no-producción de toxina.