CARACTERIZACIÓN DE LA UNIÓN DE LA PROTEÍNA ERITROCITARIA BANDA 3 A LINFOCITOS B NORMALES Y LEUCÉMICOS

MORANDE PABLO; GALETTI JEREMÍAS; BORGE MERCEDES; NANNINI PAULA; OPPEZZO PABLO; BEZARES FERNANDO; GAMBERALE ROMINA; GIORDANO MIRTA

La Falda-Córdoba

Congreso; Congreso de la SAI; 2008

SAI

Los anticuerpos responsables de la anemia hemolítica autoinmune asociada aleucemia linfática crónica (LLC) están dirigidos contra las proteínas eritrocitarias Banda3 (B3), Rh y glicoforinas. Anteriormente demostramos que las células B leucémicas depacientes LLC unen y endocitan B3 soluble y, luego de ser activadas, pueden inducirla proliferación de linfocitos T autorreactivos. El objetivo del presente trabajo fuecaracterizar la unión de B3 a linfocitos B normales y leucémicos. Para ello purificamosB3 a partir de eritrocitos, conjugamos la proteína con biotina y analizamos su unión acélulas mononucleares de sangre periférica de pacientes LLC y dadores sanos porcitometría de flujo. Encontramos que la unión de B3 (10 μg/ml) a las células B esbloqueada por un anticuerpo monoclonal dirigido contra el dominio N-terminal de laproteína (B3N) (% de inhibición > 85%, n= 5, células LLC). Confirmamos que B3N esel dominio de B3 reconocido por los linfocitos B mediante el empleo del fragmentorecombinante (unión de B3N biotinilado a células LLC, expresada como media deintensidad de fluorescencia: 3,0 ± 2,1 vs 49,5 ± 11,2; sin B3N vs B3N 10μg/ml; n=18;p<0,01). Para determinar si los linfocitos B pueden reconocer B3 en su estadonativo preparamos dos tipos de vesículas a partir de membrana de eritrocitos: con laorientación o polaridad original (VPO) o con la polaridad invertida (VPI). Encontramosque las VPI biotiniladas se unen significativamente más a las células B que las VPO(p<0,01, n=7 para células LLC y n=4 para linfocitos B normales). Esta unión esbloqueada por un anticuerpo anti-B3N (% de inhibición > 90%, n=4). Resultadospreliminares mostraron que las VPI son capaces de inducir respuestas proliferativas endadores sanos (índice de estimulación mayor a 3, variación de cpm mayor a 1000, en2 de 6 muestras analizadas). En conclusión demostramos que los linfocitos B, pero nolos T ni las células NK, reconocen la porción N-terminal de la proteína Banda 3 cuandoforma parte de vesículas eritrocitarias, tal como se encuentran normalmente en elplasma. Proponemos que, de esta manera, los linfocitos B leucémicos podrían actuarcomo células presentadoras de antígenos eritrocitarios, iniciando la respuestaautoinmune.