Procurando um peptídeo sinal para expressar proteínas em diferentes tipos de células de mamíferos

ATTALLAH, C ; KRATJE, R ; ETCHEVERRIGARAY, M ; OGGERO, M

Brasilia

Simposio; IV Simposio do Programa de Pós Graduação em Biologia Molecular; 2014

Universidad Nacional de Brasilia

A maioria dos bioterapêuticos à base de glicoproteínas é produzida em linhagens celulares de mamíferos, porque as modificações pós-traducionais devem ser idênticas ou, pelo menos, semelhantes às obtidas em humanos. Embora as células de ovário de hamster chinês (CHO) são as mais prevalentes para produzi-los, também as células de rim embrionário humano (HEK)-293, e mieloma de camundongo (NS0) estão a ser utilizadas como linhagens celulares de alta produtividade. Por outro lado, os peptídeos sinal capazes de dirigir eficazmente a secreção de proteínas em mamíferos, são elementos chave na produção de proteína recombinante. A fim de estudar a eficácia de diferentes peptídeos sinal para dirigir a secreção da proteína verde fluorescente (GFP) e uma proteína de fusão scFv-Fc, as linhagens celulares CHO-K1, HEK293 e NS0 foram transfectadas de forma transiente e estável. Os peptídeos sinal derivados da azurocidina humana (AZ), albumina humana (mSA), da região V MOPC-63-III da cadeia kappa de uma Ig de Cricetulus griseus (mIgk C) e da região VG V-III da cadeia kappa de uma Ig humana (mIgk H), foram avaliados. A eficácia dos peptídeos sinal foi medida por microscopia de fluorescência e citometria de fluxo para a GFP, e a eficiência da secreção da proteína de fusão foi analisada por ELISA indireto específico a partir do sobrenadante de cultura de cada linhagem celular. Embora a secreção seja um gargalo na expressão da proteína, o peptídeo sinal mSA é capaz de dirigir a proteína para a via de secreção em diferentes tipos de células de mamíferos. Neste trabalho, nós designamos este peptídeo sinal como uma boa sequência para a expressão de proteínas recombinantes, inclusive anticorpos recombinantes, em diferentes linhagens de células de mamíferos, em ambas as condições de transfecção transiente e estável.