INVESTIGADORES
ATTALLAH Carolina Veronica
congresos y reuniones científicas
Título:
Expresión de proteínas recombinantes en células HEK293, NS0 y CHO-K1 empleando distintos péptidos señales
Autor/es:
ATTALLAH, C. ; KRATJE, R. ; ETCHEVERRIGARAY, M. ; OGGERO, M
Lugar:
Valparaíso
Reunión:
Simposio; VI Seminario Latinoamericano de Tecnología de Cultivo de Células; 2014
Institución organizadora:
Pontificia Universidad Católica de Valparaíso
Resumen:
La demanda de proteínas terapéuticas recombinantes se expande significativamente. Existe, por lo tanto, una constante necesidad de incrementar la productividad de las líneas celulares empleadas para su obtención mediante el desarrollo de modificaciones que optimicen su producción. Por un lado, las células CHO, derivadas de hámsteres, son las más utilizadas para tal fin, aunque también se emplean otros tipos de células, como las células humanas HEK y las NS0 de mieloma de ratón. Por otro lado, los péptidos señales (SPs), capaces de dirigir eficazmente la secreción de proteínas, son elementos claves en la producción de proteínas recombinantes.Hasta el momento, los estudios realizados para evaluar la eficiencia en la secreción de diferentes SPs se han focalizado en el empleo de células CHO, por lo que resulta atractivo evaluar y comparar dicha eficiencia en otros tipos de células de mamífero. Se construyeron 8 moléculas, productos de la combinación de 4 SPs: AZ (human azurocidin preproprotein), mSA (modified human serum albumin), mIgk C (modified Cricetulus griseus Ig kappa chain V III region MOPC 63-like precursor), y mIgkH (modified human Ig kappa chain V-III region VG precursor); y 2 proteínas: GFP (green fluorescent protein) y una proteína de fusión scFv-Fc. Se realizaron transfecciones en forma transiente y estable de células CHO K1, HEK293 y NS0. La eficiencia en la secreción de cada SP se evaluó por citometría de flujo y microscopía de fluorescencia, en el caso de la GFP, y por ELISA específico indirecto, en el caso de la proteína scFv-Fc. Las productividades más altas se obtuvieron con los SPs derivados de mSA y de mIgk H. En este trabajo se demostró que dependiendo del SP empleado en la expresión de una proteína recombinante, fue posible mejorar hasta 5 veces la productividad celular, y que el SPmSA resultó eficiente para todos los tipos celulares empleados.
