Importancia de la síntesis de glicoesfingolípidos en el estadio final de la diferenciación de las células MDCK

PESCIO L; LEOCATA NIETO F; FAVALE NO; FERNANDEZ-TOME MC; STERIN-SPEZIALE N.

Rosario

Jornada; Jornadas de Lípidos 2008; 2008

Los glicoesfingolípidos (GSLs) son un grupo heterogéneo de lípidos que participan en múltiples procesos celulares. Nuestro objetivo es estudiar su importancia en el proceso de diferenciación de las células de túbulos colectores renales. Utilizamos como modelo experimental las células MDCK, una línea celular derivada de túbulos colectores caninos, que tienen la capacidad de diferenciarse ante determinados estímulos. Estudios previos de nuestro laboratorio demostraron que la hipertonicidad induce la formación de ribete en cepillo característico de las células polarizadas y diferenciadas y que este proceso es mediado por los glicoesfingolípidos. En el presente trabajo estudiamos la distribución de la proteína zo-1, marcadora de uniones estrechas y la formación del cilio primario, indicador del estadio final de diferenciación. El estudio consistió en someter cultivos confluentes a distintas concentraciones de NaCl (isotonicidad e hipertonicidad) y en presencia de un inhibidor de la síntesis de GSLs (PDMP) o un RNA de interferencia (siRNA) dirigido contra la Glucosilceramida sintasa (GCS), la enzima limitante de la síntesis de GSLs. Se estudió la incorporación de 14C-Galactosa a los GSLs y la distribución de los marcadores por inmunofluorescencia luego de 24 y 48 horas de tratamiento. Los resultados demostraron que la hipertonicidad induce un aumento de la síntesis de GSLs tanto a las 24 como a las 48 h de tratamiento y que éste es atenuado ante la presencia de PDMP. Las imágenes analizadas mediante microscopía confocal permitieron evidenciar que la hipertonicidad induce la formación del cilio y por lo tanto el estadio final de diferenciación de las células MDCK. Pudimos comprobar que este proceso es mediado por los GSLs, así como la correcta ubicación de la proteína zo-1, ya que al inhibir su síntesis a través de un inhibidor farmacológico o silenciando la GCS, las células fueron incapaces de diferenciarse.