Efecto de daunorubicina y doxorubicina en el transporte de poliaminas y la proliferación de epimastigotes de T. cruzi

RUIZ M.D.; FRACCAROLI L.; BALCAZAR D; DE PINO V.; LAROCCA L; CARRILLO C

Resistencia

Congreso; XXX Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Protozoologia; 2018

La enfermedad de Chagas es una parasitosis endémica en América Latina causada por el protozoo Trypanosoma cruzi. Las terapias tripanocidas actuales presentan alta toxicidad por lo que existe la necesidad de identificar nuevos blancos más específicos para desarrollar nuevas terapias.Las antraciclinas son drogas antitumorales incorporadas en humanos a través del transportador de cationes orgánicos hOCT1, que presenta transporte de poliaminas con baja afinidad. Dado el rol esencial de las poliaminas en T. cruzi, el objetivo de este trabajo es evaluar el efecto de las antraciclinas en la proliferación de epimastigotes y estudiar la interacción y/o incorporación de dichos compuestos a través de la permeasa de poliaminas TcPAT12.Las cepas de T. cruzi utilizadas en este estudio fueron poblaciones clonales de Y-GFP (control) y de Y-TcPAT12-GFP (sobreexpresante del transportador TcPAT12). Las antraciclinas evaluadas fueron Daunorubicina (Dnr) y Doxorubicina (Dxr).Se evaluó el efecto de Dnr y Dxr sobre la proliferación y viabilidad de epimastigotes de T. cruzi mediante curvas de crecimiento y ensayos de MTT bajo diferentes condiciones de cultivo. Dnr y Dxr afectaron significativamente la proliferación de epimastigotes tanto de la cepa control como de Y-TcPAT12-GFP. El efecto fue dosis dependiente, mostrando valores de IC50, en ambas cepas, en el rango de ~0,3 uM para Dnr y ~3,0 uM para Dxr. La depleción de putrescina en el medio (14 días) aumentó la sensibilidad de ambas cepas a las antraciclinas (rangos de IC50 de ~0,1uM para Dnr y ~2,0 uM para Dxr).Por otro lado, evaluamos el transporte de putrescina (permeasa TcPAT12), en presencia de diferentes concentraciones de Dnr y Dxr. Para evaluar la especificidad del efecto, se estudió el transporte de arginina (TcAAAP411), lisina (TcAAP7) y riboflavina (TcRibj).Las antraciclinas afectaron el transporte de putrescina en ambas cepas. Dnr (50uM) inhibió el transporte en un 55% en la cepa Y-GFP y 20% en Y-TcPAT12-GFP, mientras Dxr (50uM) presentó una inhibición menor. La incorporación de lisina, arginina y riboflavina no se vio afectada por las antraciclinas, confirmando la especificidad del efecto. Ensayos complementarios de competencia sugirieron que Dnr es un inhibidor acompetitivo del transporte de putrescina.Concluimos que Dnr y Dxr afectan la viabilidad de los epimastigotes de T. cruzi y presentan una interacción inhibitoria con el transportador de poliaminas TcPAT12, que estaría relacionada con su capacidad tripanocida.