Glucano cíclico en Xanthomonas citri: caracterización de la mutante galU y nuevos avances en la su síntesis

VERONICA DE PINO; VP CONFORTE; PS TORRES; CN CHAZARRETA; PM YARYURA; AA VOJNOV

Rosario, Santa Fe

Congreso; XXIII Congreso Latinoamericano de Microbiología y XIV Congreso Argentino de Microbiología ALAM-CAM 2016, IV Congreso Latinoamericano de Microbiología de Medicamentos y Cosméticos ? CLAMME y la Reunión de la Sociedad Latinoamericana de Tuberculosis y Otras; 2016

Asociación Argentina de Microbiologia y Asociación Latinoamericana de MIcrobiologia

MA-0415Glucano cíclico en Xanthomonas citri: caracterización de la mutante galU y nuevos avances en la síntesisV De PinoVP ConfortePS TorresCN ChazarretaPM YaryuraAA VojnovICT Milstein-CONICET, ArgentinaLa cancrosis de los cítricos caracterizada por la formación de lesiones necróticas en hojas, tallos y frutos, está causada por el fitopatógeno Xanthomonas citri subsp. citri (Xac), ingresa a la planta por los estomas así como también por heridas, persistiendo en el espacio intercelular del mesófilo esponjoso. Esta bacteria evolucionó mecanismos para sortear la defensa de la planta y adquirir nutrientes. Entre ellos la producción de un exopolisacárido (EPS), el xantano y de un glucano cíclico, ambos vitales para la virulencia y la interacción con el huésped. El glucano cíclico β-(1,2) es sintetizado en la membrana interna de la célula y luego transportado o secretado al periplasma. A este respecto la uridina trifosfato(UTP)-glucosa-1-fosfato uridililtransferasa (GalU) catalizaría la formación de uridina difosfato (UDP)-glucosa desde UTP y glucosa-1-fosfato, que sería el dador de residuos de glucosa. El objetivo del trabajo es estudiar el verdadero rol de la proteína GalU en el proceso infectivo. Para esto se cuenta con una cepa mutante para el gen galU que no produce ni glucano cíclico ni xantano. Dicha mutante fue obtenida por transposición al azar con el EZ-Tn5, y el screening realizado con el objetivo de seleccionar bacterias afectadas en la adhesión a una superficie abiótica. La cepa mutada galU carece del fenotipo mucoso característico de Xac, por ausencia de xantano, habiéndose atribuido a este polímero el motivo de su reducida patogenicidad. En esta presentación, revelamos el efecto de la mutación en el gen galU sobre la síntesis del glucano cíclico, que no ha sido estudiado. Nuestros resultados, tanto in vivo como in vitro, demuestran que GalU se encuentra involucrada en la síntesis de glucano, ya que su expresión en trans en la mutante complementada, restaura su producción a niveles de la cepa silvestre y, como era de esperar, la producción de xantano. Utilizando un sistema de membranas totales incubadas con UDP-(14C)Glc en presencia de Cl2Mg, la síntesis del glucano in vitro fue indistinguible entre la mutante galU y la cepa silvestre, corroborando que la proteína codificada por este gen se encuentra involucrada en la síntesis de UDP-Glc. Comparando distintos aspectos fenotípicos de la cepa galU con una mutante afectada en la síntesis del xantano, demostramos que es la ausencia del glucano lo que afecta la movilidad de la cepa galU y no la ausencia de EPS. La utilización de otras mutantes afectadas en síntesis del glucano cíclico, arrojaron evidencias de que la síntesis del glucano en Xac es a través de un complejo enzimático, en vez de una sola proteína. En esa línea de investigación, se encontró que la mezcla de membranas de mutantes afectadas en distintos genes de la síntesis del glucano, restauran su síntesis si previamente se sonican y se preincuban en buffer Tris-HCl pH8 en presencia de Cl2Mg, y luego se incuban con UDP-(14C)Glc, favoreciendo la hipótesis de un complejo enzimático responsable de la síntesis de glucano cíclico.