Monitoreo masivo y caracterización de la actividad antiviral de nuevos derivados de b-carbolinas sintéticos

GONZALEZ, M. M.; BAIKER, A.; ERRA-BALSELLS, R.; NITSCHKO, H.; CABRERIZO, F.M.; VIZOSO-PINTO, M.G.

Otro; XXXIII Reunión Científica Anual de la SAV; 2013

SAV (Sociedad Argentina de Virología)

Introducción y objetivos. Los Virus Herpes Simplex tipo 1 y 2 (VHS-1 y VHS-2) causan infecciones en las mucosas oral y genital. Después de la primoinfección, establecen latencia en las neuronas y pueden reactivarse cuando el huésped se encuentra bajo estrés, se expone a la radiación UV, o sufre algún tipo de inmunosupresión. Con el surgimiento de cepas resistentes al aciclovir y sus derivados, se hace necesaria la búsqueda de nuevos tratamientos alternativos. En el presente trabajo adaptamos un ensayo de citotoxicidad en microplacas para hacer un monitoreo masivo de la actividad antiviral de una familia de alcaloides llamados b-Carbolinas (bC). Materiales y métodos. En primer lugar, se determinó la citotoxicidad directa de 21 bC, comerciales y sintéticas a diferentes concentraciones y luego se realizó un screening con con un ensayo de vitalidad basado en la reducción de una sal de tetrazolio (MTT) y adaptado para  monitorear la actividad antiviral. Brevemente, células Vero crecidas en placas de 96 pocillos, fueron infectadas con VSH-1 o VHS-2 y tratadas con diferentes concentraciones de bC. En base a ello se seleccionaron las tres sustancias con mayor actividad y se las caracterizó para determinar la EC50 en ensayos de reducción de la formación de pacas y se las comparó con aciclovir en curvas de replicación. Posteriormente se realizaron ensayos para evaluar el modo de acción de las sustancias seleccionadas: virucida, inhibición de la adhesión y de la internalización, inhibición de la replicación en el interior de la célula. Para ello se expusieron las partículas virales, las células antes de ser infectadas y las células después de ser infectadas a la acción de las bC y se evaluó la replicación viral mediante por el método de recuento de formación de placas. Resultados. Once de las bC testeadas presentaron actividad antiviral >= 60% en el ensayo de monitoreo masivo. Tres bC (metil-norharmano, N-metil-harmano y 6-metoxi-harmano) fueron caracterizadas posteriormente y se confirmó su actividad antiviral en ensayos de reducción de la formación de placa mostrando  actividad antiviral igual o superior al Aciclovir. Como resultado de los ensayos para caracterizar su modo de acción, podemos decir que Metil-norharmano, N-metil-harmano y 6-metoxi-harmano son virucidas ni bloquean la adhesión y/o entrada del virus en la célula sino que actúan en pasos más tardíos en el ciclo de replicación viral. Además, cuantificando el n° de copias de genoma viral, por qPCR y pudimos observar que el mismo se encuentra significativamente reducido (p<0.05) en las células tratadas con bC durante la infección con HSV-1 y HSV-2. Conclusiones. En un screening para monitorear la actividad antiviral de 21 bC sintetizadas por el grupo y comerciales, encontramos once con potencial actividad antiviral contra VHS-1 y VHS-2. Metil-norharmano, N-metil-harmano y 6-metoxi-harmano mostraron actividades mayores o iguales al aciclovir y actuarían a nivel de la replicación del ADN.