Eliminación de fumonisina B1 por Saccharomyces cerevisiae CECT 1891, en medio líquido

PIZZOLITTO R. P.; DALCERO A. M.; SALVANO M.

Mendoza

Jornada; III Jornadas Nacionales de Biología y Biotecnología de Levaduras; 2011

INTA

Introducción: las fumonisinas son metabolitos secundarios fúngicos producidos por varias especies de Fusarium, principalmente F. verticillioides y F. proliferatum. Fumonisina B1 (FB1) es cuantitativamente la más importante por su contaminación en alimentos. Por similitud estructural de las fumonisinas con esfingonina y esfingosina, modifican el metabolismo de los esfingolipidos, son inhibidoras de enzimas y alteran el metabolismo de proteínas y el ciclo de la urea. Su rol carcinogénico está ligado a la acumulación de bases esfingoideas que causan síntesis no programada de ADN. Objetivos: investigar la capacidad de S. cerevisiae CECT 1891 de remover FB1 presente en un medio líquido y establecer la naturaleza del mecanismo involucrado. Materiales y Métodos: S. cerevisiae  CECT 1891 (Colección Española de Cultivos Tipo, Universidad de Valencia, España) fue incubada en medio sintético YPD (5 g extracto de levadura, 5 g peptona, 40 g glucosa, agua destilada 1000 ml) a 30ºC en condiciones de aerobiosis durante 24 h. Las células fueron lavadas y resuspendidas en 1 ml de buffer fosfato salino (PBS) 0.22 mM, pH 7.4 y conteniendo diferentes concentraciones de FB1, e incubadas durante el tiempo indicado a 37ºC. Las muestras fueron centrifugadas a 5000 x g  15 min. Los sobrenadantes conteniendo la FB1 remanente fueron colectados y conservados a –20ºC hasta su análisis cuantitativo por HPLC de acuerdo a la metodología propuesta por Shephard et al. (1990) y modificada por Doko et al. (1995). La remoción de FB1 fue calculada por la diferencia entre la FB1 total y la remanente. Resultados: S. cerevisiae CECT 1891 fue capaz de remover FB1 y lo hizo en proporción directa a su concentración en el medio. El tiempo de contacto FB1-levadura, necesario para la remoción, fue tan breve como 1 min. La viabilidad celular no fue requerida para la captación, e incluso la muerte por tratamiento térmico de la levadura, incrementó su eficiencia. Si bien la remoción de la micotoxina aumentó con la concentración celular, ésta nunca fue suficiente para remover toda la FB1 del medio. La FB1 previamente unida a la levadura fue parcialmente recuperada por lavados con acetonitrilo:agua (~20-25%) y con PBS (~5%). La degradación enzimática de la pared celular mostró que ésta es vital para la captación de FB1. Conclusiones: Saccharomyces cerevisiae CECT 1891 eliminó FB1 presente en medio líquido por un proceso que fue rápido, reversible, independiente de la viabilidad celular, dependiente de la concentración celular y de FB1 en el medio y la presencia de la pared celular fue vital. Por lo tanto el mecanismo involucrado puede ser considerado una adsorción física de la micotoxina a componentes de la pared celular de la levadura.