Glicosidasas de Actinoplanes missouriensis 431T activas sobre la flavanona hesperidina

LAURA S. MAZZAFERRO; ALEXANDER FRIES; ALEXANDRA WALTER; MICHAEL MULLER; JAVIER D. BRECCIA

Simposio; III Simposio Latinoamericano de Biocatálisis y Biotransformaciones; 2018

La cepa A. missouriensis 431T produce una diglicosidasa extracelular cuando crece en un medio con la flavanona hesperidina1. Esta enzima, 6-O-α-ramnosil-β-glucosidasa (αRβG), hidroliza el enlace heterosídico de hesperidina (figura). En la cercanía del gen que codifica para αRβG se identificaron otros genes que podrían estar involucrados en la biotransformación del mismo flavonoide: tres transportadores de azúcares y una α-ramnosidasa intracelular. La α-ramnosidasa fue clonada con un His-tag N-terminal (ca. 97 kDa), expresada en forma soluble en Escherichia coli, y purificada por cromatografía de afinidad. La enzima purificada fue capaz de hidrolizar los sustratos artificiales 4-metilumbelliferil-α-ramnopiranósido y 4-nitrofenil-α- ramnopiranósido. La enzima mostró un pH óptimo de 6 (50 mM buffer citrato de sodio) y una temperatura óptima aparente de 40 oC con el sustrato 4-nitrofenil-α-ramnopiranósido. Al incubar hesperidina con la α-ramnosidasa fue posible detectar hesperetina glucosilada mediante HPLC-MS; es decir, la enzima fue capaz de reconocer e hidrolizar ramnosa a partir de un producto natural (Figura). Esta enzima es una nueva contribución al toolkit de enzimas activas sobre metabolitos secundarios de origen vegetal, y podría utilizarse para la transformación de otros ramnósidos, tales como terpenos o pectina.