Evaluación de una formulación compuesta por proteínas recombinantes e ISCOMATRIX TM destinada a la inmunoprofilaxis de la mastitis bovina provocada por Staphylococcus aureus

PUJATO N; CAMUSSONE MC; VEAUTE C; RENNA MS; CALVINHO LF; MARCIPAR I

Congreso; LVII Reunión anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica. LX Reunión Científica anual de la Sociedad Argentina de Inmunologia; 2012

Staphylococcus aureus es el principal causante de mastitis bovina en la Argentina. Actualmente no existen estrategias de inmunoprofilaxis efectivas contra las infecciones estafilocóccicas, pero los nuevos conocimiento acerca de los factores de virulencia junto con la disponibilidad de nuevos adyuvantes podría contribuir al desarrollo de vacunas protectivas. El objetivo de nuestro grupo de trabajo es desarrollar un inmunógeno multicomponente que integre moléculas bacterianas que intervienen en las distintas etapas de la infección y formularlos con el adyuvante de nueva generación ISCOMATRIXTM. Hasta el momento evaluamos 3 de las proteínas candidatas. Fragmentos de ADN correspondientes a Clumping Factor A (Clf), proteína de unión a fibronectina A (FnBP) y toxina beta (β-tox) de S. aureus se clonaron en pET 32a/E. coli, se expresaron y purificaron. Se inmunizaron vaquillonas Holstein preñadas con 2 dosis, 45 y 15 días antes del parto, de una mezcla de 0,6 mg de las proteínas obtenidas (grupo R, n= 4), o con PBS (grupo C, n=6), ambos formulados con ISCOMATRIX. Mediante ELISA indirecto se evaluó IgG total en suero. Se vio que el grupo R generó mayores niveles de anticuerpos contra las proteínas recombinantes y nativas respecto del C (p<0,05). Se comprobó la capacidad de los anticuerpos anti rβ-tox de inhibir la actividad hemolítica de la exotoxina sobre eritrocitos bovinos y la capacidad  los anticuerpos anti rClf y rFnBP de opsonizar la bacteria y favorecer la fagocitosis por neutrófilos bovinos, mediante citometría de flujo. Finalmente se determinaron por Real Time PCR los niveles de expresión de TNF-α, IL-10 e IL-12, los cuales fueron significativamente mayores en el grupo R respecto del grupo C (p<0,05). La formulación evaluada fue capaz de inducir anticuerpos específicos y funcionales en bovinos, indicando la factibilidad de nuestra estrategia para lograr una vacuna y propiciando la incorporación de nuevas subunidades a la misma.