Interacción huésped-hongo: rol de una lipasa de Candida albicans sobre células de la inmunidad innata. Mecanismo de injuria celular

PARAJE M.G; RENNA M.S; CORREA S.G; SOTOMAYOR C.E

Buenos Aires

Congreso; XVII Congreso Latinoamericano y X Congreso Argentino de Microbiología. Organizado por la Asociación Argentina de Microbiología (AAM).; 2004

Candida albicans es un componente común de la flora oral y gastrointestinal en individuos sanos, mientras que en pacientes inmunocomprometidos cambios en la estructura y la bioquímica del hongo están asociados al aumento de su invasividad y a la habilidad de provocar enfermedad. Durante la progresión del proceso infeccioso están activamente involucrados eventos transcripcionales relacionados a la morfogénesis y a la producción de factores de virulencia tales como enzimas hidrolíticas. Se ha descripto que C.albicans posee la habilidad de secretar enzimas como esterasas y/o lipasas (LIP), aunque el significado biológico y el rol de estas enzimas en la patogenia y progresión de la infección aún no han sido establecidos. En la interacción inicial entre el hongo, sus factores de virulencia y los tejidos del huésped, células de la inmunidad innata como los macrófagos están activamente involucradas. En nuestro laboratorio hemos desarrollado un modelo de candidiasis en ratas Wistar que permite evaluar los eventos tempranos de esta interacción. Un marcado compromiso de la función de la célula macrofágica y francos signos de hepatotoxicidad (esteatosis y desequilibrios lipídicos) estuvieron presentes al día 3 de la infección. En la búsqueda de factores de virulencia que puedan contribuir a las alteraciones biológicas observadas, purificamos una proteína de 70 kDa con actividad lipasa (LIP) de la cepa en estudio. El objetivo de este trabajo fue estudiar si durante la interacción LIP-macrófagos la lipasa tiene capacidad de injuriar a la célula inmune. Para ello trabajamos con macrófagos purificados (1x106 cel/well) cultivados en presencia de dos concentraciones de LIP (25 U y 100 U) durante 18; 24; 48 y 72 hs. Sobre estas células se evaluó: cambios en la permeabilidad de la membrana por exclusión del colorante vital Azul de Tripán; citotoxicidad por la liberación de la enzima lactato dehidrogenasa (LDH) y la inducción de apoptosis por coloración con DAPI y Citometría de Flujo (FACS). Mediante recuento diferencial se observó que el número de macrófagos teñidos con Azul de Tripán se modificó en función de la concentración y el tiempo de cultivo, observándose un 28,4±3,3% y 39,2%±8,5 de células muertas a las 72 h con 25 y 100 U de LIP, respectivamente. La liberación de LDH al medio extracelular se determinó por colorimetría y los resultados se expresaron como índice de actividad LDH respecto al basal. A tiempos cortos LIP no modificó notablemente el índice basal, mientras que a las 72 h 25 U de LIP causaron moderada liberación de LDH (Ín:2,3). A la mayor concentración (100 U) el daño fue notorio, mostrando un índice de 4,3. El estudio morfológico de células apoptóticas efectuado sobre citospin de macrófagos utilizando la tinción de DAPI permitió observar la presencia de típicos núcleos azules de cromatina condensada partir de las 48h de cultivo para la mayor concentración de LIP empleada. Estos resultados fueron confirmados mediante la evaluación del contenido de DNA hipodiploide utilizando la técnica de incorporación de Ioduro de Propidio y FACS. Los resultados obtenidos mostraron que la lipasa fue capaz de injuriar a la célula macrofágica y que la magnitud y tipo de daño estuvo relacionada a la concentración y tiempo de contacto del factor fúngico con la célula del huésped. Estudios de nuevos factores de virulencia como la lipasa podrían contribuir a esclarecer la patogénesis de infección por C.albicans por alteración de células de la inmunidad temprana.