CLONADO Y CARACTERIZACIÓN DE UNA ADENILIL CICLASA PUTATIVA EN Giardia lamblia

ZURITA, ADOLFO; BIRNBAUMER L

Ciudad Autónoma de Buenos

Congreso; XXV Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias,; 2012

Sociedad Argentina de Protozoología y Enfermedades Parasitarias

La infección causada por el parásito intestinal G. lamblia (giardiasis) es la causa más frecuente de diarrea y mala absorción en el mundo, la cual está causada principalmente por la ingestión de agua contaminada con quistes del parásito. Se a descripto que la proteína quinasa A (PKA) regulada por AMPc juega un papel importante en el proceso de inicio de la infección (desenquistamiento). No obstante la presencia en G. lamblia de las enzimas que regulan los niveles de AMPc citoplasmático, como lo son Adenilil Ciclasa (AC) y Fosfodiesterasa (PDE), no han sido descriptas hasta la fecha. Mediante análisis del genoma de G. lamblia se identificó la secuencia de una putativa AC de este parásito (gAC). Dicha secuencia codifica una proteína de 642 aminoácidos con dos regiones transmembrana en el extremo N-terminal y un único dominio catalítico en el extremo C-terminal. Hasta el presente, hemos logrado expresar y purificar de bacteria tres construcciones de gAC-His6 llamados gAC118, gAC268 y gAC301 (según el aminoácido de origen) donde, previa remoción de los dominios transmembrana, el dominio catalítico fue expresado en conjunto con un epitope His6 en el extremo N-terminal. La actividad adenilil ciclasa de estas construcciones de gAC fue confirmada luego mediante un ensayo enzimático in vitro en presencia de [32P]a-ATP donde se midió la síntesis de [32P]-AMPc. Ensayos posteriores demostraron que esta actividad es dependiente de la presencia de Mn2+ y que a su vez es constitutiva e independiente de la presencia de de forskolina (un agonista de AC). Interesantemente, encontramos que la actividad de gAC es parcialmente inhibida en presencia del nucleótido GTPgS. Esta observación sugiere que gAC sería capaz de interaccionar de manera competitiva con el nucleótido GTP y/o poseer actividad dual Adenilil/Guanil ciclasa. Estos resultados preliminares sugieren que gAC posee actividad Adenilil Ciclasa y que estaría involucrada en la regulación de los niveles de AMPc en G. lamblia.