Modelado molecular y ensayo enzimático para la determinación del efecto de inhibidores de diseño sobre la actividad de la enzima Adenilil Ciclasa 1 de G. lamblia.

VEGA HISSI ESTEBAN; GARRO ADRIANA; ENRIZ, DANIEL; YANEFF AGUSTIN; DAVIO CARLOS; ZURITA ADOLFO

Mendoza

Congreso; XI Congreso de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2022

Sociedad Argentina de Protozoología

Está descripto que los mecanismos de transducción de señales mediadas por AMPc en G. lamblia estarían relacionados con algunos de sus procesos de crecimiento y diferenciación adaptativa de este parásito intestinal. Recientemente, describimos que G. lamblia posee un mecanismo de síntesis y degradación de AMPc que incluye dos enzimas adenilil ciclasa (gAC1 y gAC2) y una fosfodiesterasa (gPDE). Estas enzimas poseen muy baja identidad (~30%) con respectos a sus homólogos en mamíferos⁠, lo que sumado a su importancia fisiológica, las convierte en blancos para el desarrollo de agentes farmacológicos específicos.Con este objetivo en mente utilizamos la siguiente estrategia:a) Desarrollar un ensayo de actividad adenilil ciclasa in vitro. Para esto logramos clonar y purificar de bacteria el dominio catalítico de la enzima gAC1. Esta enzima demostró tener actividad adenilil ciclasa dependiente de Ca2+ y Mn2+ y resultó un excelente modelo para el testeo de inhibidores farmacológicos. b) Desarrollar un modelo molecular de gAC1 in silico.A partir de la secuencia del dominio catalítico de gAC1, se logró generar un modelo molecular de la estructura terciaria de esta enzima. En el presente trabajo mostramos primeramente los resultados de ensayos de inhibición enzimática de gAC1 en presencia de una batería de compuestos potencialmente inhibidores. Posteriormente, aquellos inhibidores con mayor actividad (2-catecol estrógeno y AMJ-47) fueron utilizados en análisis de ?docking? y ?dinámica molecular? con el modelo de gAC1. Los resultados de estos ensayos in silico estuvieron en concordancia con los ensayos enzimáticos, lo que avalarías la robustez del modelo molecular de gAC1 generado. Más adelante, confiamos que la utilización de los ensayos in silico nos permitirán anticipar el comportamiento de nuevos inhibidores de gAC1 obtenidos por diseño, de los cuales seleccionaremos los mejores para su síntesis y evaluación en ensayos in vitro y/o in vivo.