Interacción de biomoléculas redox con membranas de DMPC soportadas sobre oro

MARÍA ANTONIETA DAZA MILLONE; NICOLÁS G. TOGNALLI

La Plata (Pcia. Bs As.)

Jornada; Jornadas del 60 aniversario del INIFTA; 2008

INIFTA

La elaboración de sistemas biomiméticos sencillos para estudios de interacción molecular es de amplio interés en las biociencias. En particular, existe una continua búsqueda de modelos de membranas biológicas en soportes sólidos, ya que permiten su caracterización mediante distintas técnicas de superficie. El empleo de soportes metálicos brinda además la posibilidad de detectar por métodos electroquímicos aquellas moléculas redox que sean capaces de difundir a través de la membrana acercándose una distancia donde puedan ocurrir procesos de transferencia de carga. En este trabajo se prepararon membranas soportadas de dimiristoilfosfatidilcolina (DMPC) por fusión de vesículas sobre electrodos de oro liso y rugoso. Estos sustratos se modificaron con una monocapa autoorganizada de ditiotreitol (DTT, un ditiol hidroxilado), para que la superficie se tornara hidrofílica. Para verificar que la membrana de DMPC fuera continua (que cubra todo el sustrato sin defectos significativos) y fluida (que permita la difusión de moléculas liposolubles) se emplearon como sondas dos moléculas con propiedades redox y ópticas. Se sabe que el Azul de Metileno (MB) atraviesa las membranas celulares por lo que se lo eligió como sonda de fluidez. Mediante medidas de voltamperometría cíclica (CV) y de espectroscopía Raman in-situ, se determinó que el MB difunde a través de la membrana ya que fue posible detectar su cupla redox y que las moléculas adsorbidas débilmente en la superficie externa se pierden en tiempos cortos. Como sonda de continuidad se utilizó el dinucleótido de Flavina-Adenina (FAD), cuyo grupo pirofosfato lo inhabilita para cruzar barreras hidrofóbicas. En este caso, no se pudo detectar la cupla redox, sin embargo las medidas de Raman in-situ revelaron una cierta cantidad de FAD adsorbido que se perdía rápidamente al comenzar el primer ciclo de CV. Se concluyó que la membrana era continua y que el FAD se inmoviliza en la superficie externa de la membrana, a una distancia tal que no ocurren procesos de transferencia de carga.