Participación de loops extracitoplasmáticos en la interacción entre acuaporinas subtipo PIP.

JOZEFKOWICZ CINTIA; ROSSI PABLO; BELLATI JORGE; AMODEO GABRIELA; ALLEVA KARINA

Buenos Aires

Congreso; XL Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011

Sociedad Argentina de Biofísica

Participación de loops extracitoplasmáticos en la interacción entre acuaporinas subtipo PIP. Cintia Jozefkowicz1, Pablo Rosi2, Jorge Bellati1, Gabriela Amodeo1, Karina Alleva1 1Departamento de Biodiversidad y Biología Experimental, FCEN, UBA, Buenos Aires, Argentina.cintia.jozef@gmail.com. 2INQUIMAE, FCEN, UBA, Buenos Aires, Argentina.   Las acuaporinas de plantas que se localizan principalmente en membrana plasmática (MP) reciben el nombre de PIP. Entre ellas pueden diferenciarse dos subtipos, PIP1 y PIP2. Evidencias experimentales muestran que estos dos subtipos, a pesar de su alta identidad de secuencia, presentarían capacidades funcionales diferentes: las PIP2 tendrían capacidad de transportar agua una vez localizadas en MP, mientras que PIP1 requerirían de las PIP2 para llegar a MP. Dado que las acuaporinas son canales tetraméricos esta interacción podría ocurrir mediada por la formación de heterotetrámeros PIP1-PIP2, sin embargo, el tipo de interacción, física y funcional, que se da entre estos canales es aun motivo de investigación. En este trabajo estudiamos PIP de Beta vulgaris, BvPIP2;2, BvPIP2;1 y BvPIP1;1, en el sistema heterólogo de expresión de ovocitos de Xenopus. BvPIP2;2 y BvPIP2;1 son canales de agua activos, en cambio la inyección de ARNm de BvPIP1;1 en los ovocitos no redunda en un aumento de su permeabilidad osmótica (Pf). La co-expresión de BvPIP2;2 y BvPIP1;1 genera un aumento significativo en la Pf de los ovocitos respecto a la expresión de BvPIP2;2 sola, sin embargo si se co-expresan BvPIP2;1 y BvPIP1;1 dicho incremento no se observa. Interesantemente, la secuencia de BvPIP2;1 presenta algunas diferencias en su loop A respecto de otras PIP2. Estudios in silico de la estructura del loop A muestran que este loop podría estar involucrado en el contacto entre monómeros del tetrámero. Con el fin de determinar si el loop A podría estar involucrado en la interacción funcional BvPIP2;1-BvPIP1;1, se realizaron mutaciones puntuales. Las mutantes de BvPIP2;1 son capaces de transportar agua y al ser co-expresadas con BvPIP1;1 permitieron detectar la clásica interacción funcional descripta entre PIP1 y PIP2. Estos resultados sugieren que el loop A podría ser clave para la formación de tretrámeros mixtos de canales de agua. 1. Referencias:. Agradecimientos: Subsidios de KA: Prestamo BID PICT 2010 02042, UBACyT 2010-2012, PIP 0190.