Efecto de la endotelina-3 en la expresión de acuaporina-2 en riñon de rata.

PASSALAQCUA MARIA DEL ROSARIO; MAJOWICZ MONICA; ALBERTONI BURGHESE MARIA FLORENCIA; FIORENZANO ROSARIO; JOZEFKOWICZ CINTIA; ORTIZ MARIA; VIDAL NORBERTO

Mar del plata, Buenos Aires, Argentina.

Congreso; XXVIII Reunión Anual Científica del Consejo Argentino de hipertensión arterial ¨Dr. Eduardo Braun Menéndez¨- Sociedad Argentina de Cardiología; 2007

Consejo Argentino de hipertensión arterial.

En nuestro laboratorio estudiamos el efecto de las endotelinas sobre proteínas involucradas en la regulación del equilibrio hidrosalino. El objetivo de este estudio fue investigar el efecto de endotelina-3 en la expresión de AQP2 en médula renal de rata. Los riñones de ratas Wistar machos se dividieron en 6 grupos, se cortaron en slices y se incubaron durante una hora de la siguiente forma: A: Control (Krebs), B: ET3 (0.09 uM), C: BQ610 (0.55uM), D: ET3 + BQ610 (0.09 uM y 0.55 uM respectivamente), E: BQ788 (1mM), F: ET3 + BQ 788 (0.09 uM y 1 uM respectivamente). Luego de la incubación, los slices de médula se homogeneizaron y se eliminaron los núcleos y el debris celular con dos centrifugaciones sucesivas (1000g 10 min y 10000g 10 min). Se determinó la concentración de proteínas por el método de Bradford. Las muestras se separaron electroforéticamente y se transfirieron a membranas de PVDF que se incubaron con anticuerpo pimario de conejo anti AQP2 de rata seguido de un anticuerpo secundario biotinilado de burro anti IgG de conejo. Las membranas se revelaron utilizando el sistema avidina-biotina-peroxidasa. Los niveles relativos de proteína se determinaron utilizando el programa GelPro Analyzer 3.1. Los datos fueron analizados mediante ANOVA usando el test de Bonferrini como post test, p˂0.05. Los resultados fueron obtenidos de al menos tres experimentos independientes. Los resultados se expresaron en unidades arbitrarias de densidad óptica. La incubación con ET-3 aumento los niveles de AQP2 (1.00 ± 0.12 vs 2.14 ± 0.24 para A y B respectivamente). El aumento se revirtió mediante la incubación con BQ610, un bloqueante específico de los receptores ETA (D: 0.936 ± 0.20), pero no se vio afectado por la incubación previa con BQ788, un bloqueante específico de los receptores ETB (F: 2.29 ± 0.55). Los antagonistas no tuvieron efecto por si mismos sobre la expresión de AQP2 (1.19 ± 0.16 y 0.97 ± 0.14 para C y E respectivamente. Conclusiones: Estos resultados indican que la endotelina-3 aumentaría la expresión de aquaporina -2 en las membranas de la médula renal y que este efecto estaría mediado por el subtipo de receptores ETA. Hasta el momento no se había descripto una acción de ET-3 sobre AQP2.