Efecto de la endotelina-3 sobre la expresión y translocación de acuaporina-2 en médula renal de rata.

ALBERTONI BURGHESE MARIA FLORENCIA; MAJOWICZ MONICA; PASSALAQCUA MARIA DEL ROSARIO; FIORENZANO ROSARIO; JOZEFKOWICZ CINTIA; ORTIZ MARIA; VIDAL NORBERTO

Mar del plata, Buenos Aires, Argentina.

Congreso; Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC) LII Reunión Científica Anual; 2007

Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC)

Se investigo el efecto de la endotelina-3 (ET3) sobre la expresión y translocación de acuaporina -2 (AQP2) en médula renal de rata (MR). Las MR provenientes de ratas Wistar machos se dividieron en 6 grupos, se cortaron en slices y se incubaron a 37 °C durante una hora según: A: Control (Krebs), B: ET3 (0.09 uM), C: BQ610 (0.55uM), D: ET3 + BQ610, E: BQ788 (1mM), F: ET3 + BQ 788. Los inhibidores se agregaron 15 minutos antes que la ET3. Luego de la incubación, el tejido se homogenizo en un buffer apropiado; las proteínas se separaron electroforéticamente y se transfirieron a membranas de PVDF sobre las que se realizó un Western Blot para detectar AQP-2 y determinar si al incubar con ET-3 se producían cambios en la expresión de la proteína. El efecto de ET-3 sobre la translocación de AQP-2 se determinó midiendo AQP-2 en vesículas apicales (HD) y subapicales (LD) obtenidas mediante centrifugación diferencial. Las proteínas de la muestra fueron separadas electroforéticamente y transferidas a membrana de PVDF para detectar AQP-2 por Western Blot. Los inmunoblots se cuantificaron analizando la DO de las bandas y determinando la relación HD/LD. ET3 aumentó los niveles de AQP-2 (1.00 ± 0.12 vs 2.14 ± 0.24 para A y B respectivamente). El aumento se revirtió mediante la incubación con BQ610, bloqueante específico de los receptores ETA (D: 0.936 ± 0.20), pero no se vio afectado por la incubación previa con BQ788, bloqueante específico de los receptores ETB (F: 2.29 ± 0.55). Los antagonistas no tuvieron efecto por si mismos sobre la expresión de AQP2 (1.19 ± 0.16 y 0.97 ± 0.14 para C y E respectivamente) p˂ 0.05 vs A. ET3 no produjo cambios significativos en la traslocación de AQP-2 hacia membrana (0.41 ± 0.06 vs 0.49 ± 0.13; n = 6). Conclusiones: ET3 aumentaría la expresión de AQP-2 in Vitro por medio de receptores ETA, pero no produciría cambios en la distribución de la proteína entre la membrana plasmática y la vesículas intercelulares.