Modelado molecular y ensayo enzimático para la determinación del efecto de inhibidores de diseño sobre la actividad de la enzima Adenilil Ciclasa 1 de G. lamblia.

VEGA HISSI, ESTEBAN G.; GARRO, ADRIANA; ENRIZ, DANIEL R.; YANEFF, A.; DAVIO, CARLOS A.; ZURITA, ADOLFO

Mendoza, Argentina

Congreso; XI Congreso de la Sociedad Argentina de Protozoología; 2022

Sociedad Argentina Protozoología

Estádescripto que los mecanismos de transducción de señales mediadaspor AMPcenG. lambliaestaríanrelacionados con algunosde sus procesos de crecimiento y diferenciación adaptativa deeste parásito intestinal. Recientementedescribimos que G. lamblia posee un mecanismo de síntesis ydegradación de AMPc que incluye dos enzimas adenilil ciclasa (gAC1 ygAC2) y una fosfodiesterasa (gPDE). Estas enzimas poseen muy bajaidentidad (~30%) conrespectos a sus homólogos en mamíferos⁠, lo que sumado a suimportancia fisiológica, las convierte en blancos para el desarrollode agentes farmacológicos específicos. Coneste objetivo en mente utilizamos la siguiente estrategia:a)Desarrollar un ensayo de actividad adenilil ciclasa in vitro. Para esto logramos clonar ypurificar de bacteria el dominio catalítico de la enzima gAC1. Estaenzima demostró tener actividad adenilil ciclasa dependiente de Ca2+y Mn2+ y resultó un excelente modelo para el testeo deinhibidores farmacológicos. b)Desarrollarun modelo molecular degAC1 in silico. A partir de la secuencia deldominio catalítico de gAC1, se logró generar un modelo molecular dela estructura terciaria de esta enzima. Enel presente trabajo mostramos primeramente los resultados de ensayosde inhibición enzimática de gAC1 en presencia de una batería decompuestos potencialmente inhibidores. Posteriormente,aquellos inhibidores con mayor actividad (2-catecol estrógeno yAMJ-47) fueron utilizados en análisis de “docking”y “dinámica molecular”con el modelo de gAC1. Losresultados de estos ensayos in silicoestuvieron enconcordancia con los ensayos enzimáticos, lo que avalaría larobustez del modelo molecular de gAC1 generado. Másadelante, confiamos que la utilización de los ensayos in siliconos permitirán anticiparel comportamiento de cientos de nuevos inhibidores de gAC1 obtenidospor diseño, de los cuales seleccionaremos los mejores para susíntesis y evaluación en ensayos in vitro y/o in vivo.