El cultivo in vitro de Lippia integrifolia (Gr.) Hie, ¿induce variación somaclonal?

IANNICELLI, JESICA; PÉREZ DE LA TORRE, MARIANA; COVIELLA, MARÍA ANDREA; VAN BAREN, CATALINA MARÍA; ELECHOSA, MIGUEL; PACHECO, MARÍA GABRIELA; ESCANDÓN, ALEJANDRO SALVIO

San Miguel de Tucumán

Simposio; X Simposio Nacional de Biotecnología REDBIO Argentina; 2015

REDBIO Argentina

Dada la situación de riesgo de numerosas plantas aromático-medicinales de nuestro país, entre ellas L. integrifolia, el desarrollo de un protocolo de propagación in vitro es necesario para la aplicación de biotécnicas a fin de obtener nuevos genotipos mejorados y proteger estos recursos. Asimismo, es necesario el estudio de la estabilidad genética de los cultivos, debido a la posibilidad de generar variantes al aplicar estas técnicas. La multiplicación in vitro de L. integrifolia se llevó a cabo en medio MS con 2.2 µM de BAP. Se desarrollaron callos que dieron origen a brotes de novo, obteniéndose una tasa de multiplicación promedio de 16 brotes/explanto. Asimismo, se dejó desarrollar brotes a partir de yemas axilares pre-existentes, a modo de controles.Los callos obtenidos fueron evaluados histológicamente, demostrando ser organogénicos al observarse la formación de conos meristemáticos y primordios foliares. Los brotes regenerados de estos callos fueron aislados para su enraizamiento, tras lo cual, junto con los brotes desarrollados a partir de yemas axilares, fueron aclimatados y llevados a invernáculo. Se encontraron diferencias en el número de hojas por nudo en las plántulas obtenidas de in vitro por los dos tipos de regeneración, con respecto a la planta madre, observándose 3-4 hojas/nudo, siendo 2 hojas/nudo en la planta madre se observaron Se estudió la estabilidad genética de las plantas obtenidas por cultivo in vitro, a fin de detectar posibles variantes somaclonales. Para esto se analizó la planta madre -como control- y 4 vitroplantas desarrolladas a partir de yemas pre-existentes y 5 vitroplantas derivadas de brotes de novo, a través de 13 iniciadores para amplificar marcadores ISSRs (Inter Simple Sequences Repeats), los que produjeron 223 bandas, detectando un 46.64% de polimorfismo entre las vitroplantas y la planta madre, calculado a través de la frecuencia alélica. La planta madre exhibió bandas únicas con todos los iniciadores utilizados con respecto a las vitroplantas, tanto aquéllas derivadas de brotes de novo, como las desarrolladas a partir de yemas pre-existentes. Asimismo, con uno de los iniciadores se detectaron polimorfismos entre las plantas de brotes de novo y las desarrolladas de yemas pre-existentes.La variación somaclonal puede deberse no sólo al pasaje por un estado de callo (organogénesis indirecta), sino a varios factores inherentes al cultivo en vitro per se. Esto se evidencia en los polimorfismos detectados en ambos tipos de plántulas regeneradas. Estos resultados resaltan la importancia que tiene el cultivo de tejidos como técnica para la búsqueda de potenciales nuevas variantes que promuevan el desarrollo del germoplasma nativo, a fin de proveer nuevas alternativas y así proteger nuestros recursos.