Detección de autoanticuerpos anti proinsulina mediante citometría de flujo para el diagnóstico de Diabetes Mellitus Autoinmune

SABLJIC, ADRIANA V; FACCINETTI, NATALIA I.; GUERRA, LUCIANO L.; PENAS, ALBERTO; MARFÍA, JUAN IGNACIO; TRABUCCHI, ALDANA; POSKUS, EDGARDO; VALDEZ, SILVINA N.

Mar del Plata

Congreso; XXI Congreso Argentino de Diabetes; 2018

Sociedad Argentina de Diabetes

Introducción La Diabetes Mellitus (DM) constituye un grupo heterogéneo de patologías que conducen a una elevación de la glucosa en sangre. Se distinguen dos tipos principales de DM (DM tipo 1 y DM tipo 2) las cuales requieren tratamientos diferentes para el control metabólico de la enfermedad, por lo cual, el diagnóstico preciso será fundamental para la implementación adecuada de este.La DM tipo 1 es un trastorno autoinmune que se origina por una pérdida de la tolerancia hacia componentes propios de las células beta pancreáticas productoras de insulina, lo cual lleva a la destrucción de estas células por acción de los linfocitos T citotóxicos. Como consecuencia de ello, se generan autoanticuerpos dirigidos contra diferentes antígenos de las células beta pancreáticas, entre los cuales se encuentran los que presentan especificidad hacia la proinsulina (PAA). Dado que estos son los primeros anticuerpos que se detectan en circulación durante el desarrollo de la enfermedad, su detección es muy útil para el diagnóstico precoz de la patología.Los métodos radiométricos de referencia para la detección de marcadores de DM son ensayos de lata sensibilidad y especificidad, pero presentan alto costos, requieren del uso de material radiactivo que genera residuos altamente contaminantes del medioambiente y a su ejecución se limita a centros de investigación básica y aplicada con infraestructura y habilitación necesaria. Por lo tanto, es imprescindible el desarrollo de nuevas generaciones de ensayos no radiométricos de menor costo y complejidad operativa, que permitan mayar aplicación en laboratorios de mediana y baja complejidad y faciliten el acceso al diagnóstico a un mayor número de pacientes?ObjetivosEl objetivo del trabajo consistió en el desarrollo y optimización de un inmunoensayo para la detección de anticuerpos anti-proinsulina (PAA) basado en Citometría de Flujo (CF), aplicable al apoyo diagnóstico en DM autoinmune.?Materiales y métodosSe emplearon 36 sueros de individuos controles normales y 24 muestras de pacientes infanto juveniles con DM tipo 1, PAA positivos por el método de referencia (Ensayo de Unión de Radioligando -RBA-).Para la CF se empleó un modelo de doble paratope en el cual se incubaron durante un período de 4 días, los sueros con microesferas de poliestireno de 5 µm adsorbidas con Proinsulina (PI) expresada en E. coli (cepa GI724) como proteína de fusión con Tiorredoxina (TrxPI), y TrxPI biotinilada. Pasado este plazo, los inmunocomplejos formados fueron reportados empleando estreptavidina conjugada a Ficoeritrina. La detección por CF se realizó a λexcitación= 488 nm. Se analizó la media geométrica (GeoM) de las señales obtenidas y los resultados fueron expresados en Standard Deviation scores (SDs= (GeoMsuero analizado-GeoMmedia controles normales)/Desvío Estándarcontroles normales). Se consideraron positivas las muestras cuando el valor de SDs > 3,0.La significación estadística se evaluó mediante un test no paramétrico: test U de Mann-Whitney para datos no pareados y se consideró estadísticamente significativo un valor de p < 0,05.