Desarrollo de un novedoso inmunoensayo basado en citometría de flujo para la detección simultánea de Diabetes Mellitus Autoinmune y Enfermedad Celíaca

BOMBICINO, SILVINA S.; SABLJIC, ADRIANA V.; GUERRA, LUCIANO L.; FACCINETTI, NATALIA I.; MARFÍA, JUAN IGNACIO; TRABUCCHI, ALDANA; POSKUS, EDGARDO; VALDEZ, SILVINA N.

Mar del Plata

Congreso; XXI Congreso Argentino de Diabetes; 2018

Sociedad Argentina de Diabetes

Introducción.La Diabetes Mellitus Autoinmune (DMA) y la Enfermedad Celíaca (EC) son enfermedades crónicas, poligénicas y multifactoriales vinculadas con una disfunción del sistema inmune.Se presentan en simultaneidad en un 10% de los pacientes, por lo cual se recomienda el screening de rutina para la EC en pacientes con reciente diagnóstico de Diabetes Mellitus tipo 1.Objetivo.Desarrollar y optimizar un novedoso inmunoensayo basado en citometría de flujo (FloCMIAmultiplex) que permita la detección simultánea y discriminativa, en un único acto analítico, de los principales marcadores de autoinmunidad involucrados enDMA (IA-2A y GADA) y EC (tTgA).Materiales y Métodos.Se emplearon 36 sueros humanos normales y 27 muestras de pacientes con DM tipo 1.Para el FloCMIAmultiplexse empleó un modelo de doble paratope incubando los sueros con una mezcla de microesferas de poliestireno de 4 m y diferente fluorescencia interna, cada una adsorbida con un autoantígeno recombinante: Glutamato decarboxilasa (TrxGAD), Tirosina fosfatasa IA-2 (TrxIA-2) o Transglutaminasa tisular (His6tTg), y una mezcla de dichos autoantígenosmarcados con biotina. Luego de la incubación, los inmunocomplejos formados sedetectaron empleando estreptavidina conjugada con Ficoeritrina (λexcitación= 488 nm) y se adquirió en un citómetro de flujo. Las poblaciones de microesferas fueron discriminadas de acuerdo conla intensidad de emisión de su fluorescencia interna. Los resultados fueron expresados en Standard Deviation scores (SDs), considerando positivas las muestras con valores de SDs > 3,0.Resultados.InmunoensayoFloCMIAmultiplexGADAIA-2AtTgARango(SDs)(-1.463)-127,92(-1,318)-36,85(-2,287)-107,55Sensibilidad (%)a59,340,744,4Especificidad (%)b86,186,177,8a% de pacientes positivos para cada marcador del total de pacientes estudiadosb 100% menos el porcentaje de falsos positivosConclusiones.En forma preliminar, se logró desarrollar un ensayo multiplex que permitió discriminarlosautoanticuerpos GADA, IA-2A y/o tTgA en un único acto analítico, en colecciones de sueros de pacientes con DMA y/o EC. Esto representa una ventaja operativa respecto a realizar cada determinación en forma individual, reduciendo costos, tiempo y con menor impacto ambiental.