Aplicación del autoantígeno IA-2 recombinante en inmunoensayos para el diagnóstico de Diabetes Mellitus?

SABLIJC, ADRIANA V; GUERRA, LUCIANO L.; FACCINETTI, NATALIA I.; ROVITTO, BRUNO D.; TRABUCCHI, ALDANA; POSKUS, EDGARDO; IACONO, RUBÉN F.; VALDEZ, SILVINA N.

Buenos Aires

Jornada; VI Jornadas de Jóvenes Investigadores, Facultad de Ciencias Veterinarias; 2016

UBA

La proteína tirosina fosfatasa 2 asociada a insulinoma (IA-2) es uno de los principales autoantígenosvinculados a Diabetes Mellitus (DM)Autoinmune. Los autoanticuerpos anti-IA-2 (IA-2A) constituyen un marcador del proceso autoinmune que precede a la sintomatología clínica y sirve de apoyo diagnóstico a las formas de DM con componente autoinmune.El objetivo del trabajo fue desarrollarinmunoensayos no radiométricos para la detección de IA-2A,empleando IA-2 recombinante humanaexpresada en E. coli.La región intracelular de IA-2 fue expresada como proteína de fusión con Tiorredoxina (TrxIA-2ic) en lacepa GI724 y purificadapor cromatografía de afinidad a partir de la fracción intracelular soluble.Empleando dicha proteína se desarrollaron dos diseños de ELISA: Modelo indirecto,inmovilizando TrxIA-2ic-biotina a través de avidina, con posterior agregado del suero de los pacientesy detección colorimétrica del inmunocomplejo; yun modelo doble paratope, basado en la doble interacción del anticuerpo, presente en los sueros de pacientes, tanto con TrxIA-2icinmovilizado en la placa como con TrxIA-2ic-biotina soluble y posterior revelado con avidina-peroxidasa. Las muestrasde pacientes diabéticos tipo 1(n=48) fueron analizadas en paralelo por el método de referencia radiométrico (RBA).La purificación proteicadio un rendimiento de10 mg TrxIA-2ic/L cultivo con una pureza 77%. El diseño de ELISA indirecto alcanzó una sensibilidad relativa a la del RBA del 40,5% y una especificidad del 95,7%, con scores de desvío estándar(SDs) que fuerondesde -2,76 a 4,85, y una mediana de 1,05. El diseño de doble paratope presentó una sensibilidad relativa del 59,5% y una especificidad del 94,9% con un rango en SDsde -0,71-111,20 y una mediana de 1,05. Asimismo, ambos diseños detectaron 4 pacientes positivos que fueron negativos por el método de referencia. En conclusión, se logró expresar eficientemente Trx-IA-2icen E. coli ydesarrollar métodos de bajo costo, no radiométricos y ambientalmente inocuos para la evaluación de IA-2A, accesibles para muchos laboratorios.