Detección de autoanticuerpos anti-glutamato decarboxilasa mediante citometría de flujo para el apoyo diagnóstico en Diabetes Mellitus autoinmune

GUERRA, LUCIANO L.; TRABUCCHI, ALDANA; FACCINETTI, NATALIA I.; IACONO, RUBÉN F.; POSKUS, EDGARDO; VALDEZ, SILVINA N.

Mar del Plata

Congreso; LVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y LX Reunión Científica Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología (SAIC-SAI 2012); 2012

Sociedad Argentina de Inmunología

En Diabetes Mellitus (DM) tipo 1, la detección de autoanticuerpos (marcadores) es utilizada en el apoyo diagnóstico y predicción de la enfermedad. El método de referencia para su dosaje es el ensayo de unión de radioligando (RBA). En búsqueda del desarrollo de un método de menor complejidad y alta sensibilidad, en este trabajo se propuso el uso de la Citometría de Flujo (CF) para la determinación de los autoanticuerpos anti-Glutamato Decarboxilasa (GADA) en sueros de pacientes diabéticos. Se utilizaron 27 sueros de pacientes diabéticos GADA positivos por RBA y 16 sueros humanos normales. Para la CF se incubaron los sueros con microesferas de poliestireno de 4 µm adsorbidas con GAD humana fusionada con Tiorredoxina (TrxGAD) expresada en E. coli. Los inmunocomplejos fueron reportados usando un Ac conjugado con AlexaFluor 488 y la detección por CF se realizó a λexcitación= 488 nm. Las señales fueron obtenidas en unidades de Intensidad de Fluorescencia Media (IFM) y los resultados fueron expresados en Standard Deviation scores (SDs= (IFMsuero analizado-IFMmedia controles normales)/Desvío Estándarcontroles normales). La CF permitió detectar como GADA (+) al 48,2% de las muestras positivas por RBA. La mediana de la población de sueros normales resultó significativamente diferente a la de los sueros de pacientes con DM (p = 0,0005). Asimismo, los pares de datos obtenidos entre RBA y CF mostraron un apareamiento efectivo (rs = 0,4794 y p = 0,0032). En conclusión, se pudo desarrollar un inmunoensayo por CF capaz de detectar autoanticuerpos, siendo este el primer reporte de la técnica aplicada a la DM. Este método podría ser útil en la detección simultánea de varios marcadores de autoinmunidad en la misma muestra utilizando microesferas de diferente tamaño.