Desarrollo de Inmunoensayos por citometría de flujo para la detección de autoanticuerpos. Aplicación al apoyo diagnóstico en Diabetes Mellitus Autoinmune

GUERRA, LUCIANO L.; FACCINETTI, NATALIA I.; TRABUCCHI, ALDANA; IACONO, RUBÉN F.; POSKUS, EDGARDO; VALDEZ, SILVINA N.

Los Cocos, Córdoba

Congreso; LXI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2013

Sociedad Argentina de Inmunología

Los autoanticuerpos anti-glutamato decarboxilasa (GADA) están presentes en las formas autoinmunes de Diabetes Mellitus, muchos años antes de la aparición de los síntomas clínicos de la enfermedad. El método de referencia para su detección es el ensayo de unión de radioligando (RBA). El objetivo de este trabajo fue desarrollar inmunoensayos sensibles por Citometría de Flujo (CF) basados en microesferas para la semi-cuantificación de GADA: Flow Cytometric Microspheres-based ImmunoAssays (FloCMIA). Se usaron 46 sueros humanos del Servicio Inmunoanalítico de apoyo a la Diabetes (STAN-CONICET) y 40 sueros humanos normales, los cuales fueron analizados en paralelo por RBA, ELISA y 3 protocolos de FloCMIA. Para éstos se emplearon microesferas (4 µm, poliestireno) adsorbidas con Glutamato decarboxilasa fusionada a Tiorredoxina (TrxGAD) como fase sólida. El protocolo A se basó en el diseño indirecto para la determinación de Ac empleando un Ac conjugado con AlexaFluor 488. El protocolo B empleó un diseño de amplificación con estreptavidina-DTAF. Por último, el protocolo C se fundamentó en la unión de GADA a microesfera-TrxGAD y a TrxGAD-biotina, evidenciando al inmunocomplejo con estreptavidina-DTAF. Los resultados se expresaron en Unidades de desvío estándar (SDs). Tanto el ELISA, como los protocolos A y B de FloCMIA mostraron señales