Desarrollo e implementación de un ensayo de quimioluminiscencia para la detección precoz y el apoyo diagnóstico de la diabetes mellitus autoinmune

PENAS, ALBERTO; TRABUCCHI, ALDANA; POSKUS, EDGARDO; VALDEZ, SILVINA N.; IACONO, RUBÉN F.

Buenos Aires, Argentina

Congreso; XVI Congreso Argentino de Diabetes; 2008

SAD

Desarrollo e implementación de un ensayo de quimioluminiscencia para la detección del marcador GADA Penas Steinhardt A, Trabucchi A, Poskus E, Valdez SN, Iacono RF. Cátedra de Inmunología, Facultad de Farmacia y Bioquímica, UBA, e IDEHU, CONICET-UBA. Buenos Aires, Argentina. Los autoanticuerpos anti-glutamato decarboxilasa (GADA) son considerados marcadores altamente predictivos de la diabetes mellitus tipo 1 y también del requerimiento insulínico futuro en pacientes diabéticos diagnosticados en edad adulta, presuntivamente clasificados como diabéticos tipo 2 o, alternativamente, LADA. Objetivos: En el presente trabajo presentamos una nueva variante de análisis para la detección de GADA basado en la detección de una señal quimioluminiscente (QL) dependiente de la bivalencia de los GADA para formar un puente entre la proteína quimérica recombinante Trx-GAD65, inmovilizada en la fase sólida, y la Trx-GAD65 biotinilada presente en la fase fluida. Métodos: La QL desarrollada y el ELISA convencional empleado se basan en la interacción bi-específica de los GADA frente a la Trx-GAD65. En la QL, el inmunocomplejo formado es revelado mediante el agregado de estreptavidina conjugada con fosfatasa alcalina y luminol como reactivo quimioluminiscente. Las señales fueron medidas mediante un luminómetro Victor3 Wallac. Ambos tests fueron contrastados con el método radiométrico de referencia (RBA). Se analizaron 30 muestras de individuos controles normales y 94 muestras de sueros provenientes de la seroteca del Laboratorio de Inmunoendocrinología, Cátedra de Inmunología, de la Facultad de Farmacia y Bioquímica. Se evaluó la presencia de GADA en paralelo por RBA, ELISA y QL. Los resultados obtenidos fueron comparados calculando la sensibilidad y especificidad relativas de los tests no radiométricos respecto de los resultados obtenidos por RBA. Resultados: Todas las muestras de los individuos controles normales resultaron negativas por QL, RBA y por ELISA, mostrando que la especificidad fue del 100% para los tres métodos. Por otra parte, la sensibilidad relativa calculada respecto del RBA, fue del 92% para la QL y del 89% para el ELISA. Conclusiones: Estos resultados preliminares mostraron que la QL exhibió una mejor performance analítica respecto del ELISA (Sensibilidad 92% vs 89%). Debido a que se trata de una técnica de fácil implementación y de bajo costo, así como de alta sensibilidad, es intención de nuestro laboratorio implementar el método de QL como complemento de los análisis de RBA, el cual persiste como método de referencia y control confirmatorio en casos de dudosa asignación diagnóstica.