Expresión en células CHO de los principales autoantígenos recombinantes involucrados en la diabetes mellitus autoinmune.

TRABUCCHI, ALDANA; VILLALBA, ANABLEL; VALDEZ, SILVINA N.; IACONO, RUBÉN F.; POSKUS, EDGARDO

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LI Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica y LIV Reunión Científica de la Sociedad Argentina de Inmunología.; 2006

SAI

La Diabetes Mellitus tipo 1 es causada por autoinmunidad órgano-específica y aparece principalmente en individuos infanto-juveniles, pudiendo surgir también en mayores de 20 años, en cuyo caso se denomina Diabetes Tardía o Latente (LADA). Los anticuerpos anti-glutamato decarboxilasa (GADA), anti-tirosina fosfatasa IA-2 (IA-2A) y anti-Insulina/Proinsulina (IAA/PAA) son los marcadores de autoinmunidad más relevantes, usualmente determinables mediante radiometría (RBA). El objetivo del presente estudio es expresar los autoantígenos GAD65 e IA-2 en células CHO para analizar la inmunorreactividad de sueros de pacientes diabéticos con distintas bases etiopatogénicas. Metodología: Las secuencias codificantes para estos autoantígenos fueron clonadas en el vector de expresión eucariota pCIneo y con dichas construcciones se transfectaron células CHO-K1. Actualmente se dispone de dos líneas celulares estables que expresan GAD65 e IA-2, respectivamente. La expresión de tales proteínas se evaluó por Western Blot (WB) e Inmunofluorescencia Indirecta (IFI) usando un anticuerpo monoclonal anti-GAD65 y un suero policlonal anti-IA-2. Resultados: El análisis por WB reveló una banda de 65kDa y otra de 43kDa compatibles con GAD65 e IA-2, respectivamente. El análisis por IFI evidenció inmunorreactividad específica. Por microscopía inmunoelectrónica se estableció la localización subcelular de ambos autoantígenos. Conclusiones: Estos resultados preliminares indican que los autoantígenos recombinantes expresados en el contexto celular eucariota son reconocidos por anticuerpos específicos patrones. Este sistema de expresión constituye un recurso analítico alternativo al RBA para caracterizar el perfil de inmunidad humoral en pacientes con distintas características clínicas.