Desarrollo de un ensayo de tamizaje para la detección de GADA y ZnT8A empleando un antígeno quimérico recombinante

TRABUCCHI, ALDANA; SABLJIC, ADRIANA V.; MARFÍA, JUAN IGNACIO; IACONO, RUBÉN F.; POSKUS, EDGARDO; BOMBICINO, SILVINA S.; VALDEZ, SILVINA N.

Rosario, Santa Fé

Congreso; XXIII Congreso Argentino de Diabetes; 2022

Sociedad Argentina de Diabetes

Introducción. La obtención de plataformas mejoradas para la detección de autoanticuerpos en grupos de riesgo y en población general, es un desafío analítico en nuestro medio. Contar con una metodología que permita aumentar la sensibilidad en un método de screening rutinario de bajo costo, de simplicidad operativa, y que factibilice su difusión a laboratorios de baja y mediana complejidad en distintas regiones del país es de suma importancia.Objetivos. Se propusieron los siguientes objetivos: 1) Producir en el sistema baculovirus-células de insecto una molécula quimérica formada por los epitopes inmunodominantes de los autoantígenos GAD65 y ZnT8; 2) Desarrollar y optimizar inmunoensayos de tipo ELISA empleando la quimera recombinante, como herramienta en el screening poblacional para la búsqueda de autoinmunidad en pacientes diabéticos.Materiales y Métodos. El antígeno quimérico se expresó en células de insecto Sf9. El inmunoensayo desarrollado se basó en el modelo “anticuerpo puente”, basado en la doble interacción de GADA y/o ZnT8A, presentes en los sueros de pacientes, tanto con el antígeno quimérico inmovilizado a la placa como con el antígeno quimérico soluble marcado con biotina. Se evaluaron 20 sueros de pacientes diabéticos GADA+, 16 ZnT8A+ y 17 doble positivos. Se procesaron simultáneamente 33 sueros humanos normales para el cálculo del valor de corte. Los resultados se expresaron en score de desvío estándar (sDS). Se comparó la performance del diseño frente al método de referencia (RBA).Resultados. De los 53 sueros de pacientes evaluados, 21 (40%) fueron detectados como positivos por el ELISA puente. La especificidad (100 - el % de individuos controles normales detectados como positivos) fue del 94%. Este diseño alcanzó una sensibilidad relativa al RBA del 60% para la detección de GADA con sDS desde -0,68 a 6,77, 18% para la detección de ZnT8A con sDS desde -1,85 a 5,04, y 35% para la detección de los doble positivos con sDS desde -1,63 a 6,14. El CV intra-ensayo fue de 6%, y el CV inter-ensayo de 4,7%.Conclusiones. Se logró producir un antígeno quimérico recombinante el cual fue empleando en el diseño de un ELISA puente, para la detección simultánea y no discriminativa de GADA y ZnT8A. Los resultados preliminares obtenidos alientan la optimización final del diseño propuesto como una herramienta analítica de fácil ejecución que permite la detección de GADA y ZnT8A simultáneamente. El inmunoensayo desarrollado es útil como método de screening rutinario en laboratorios de mediana y baja complejidad.