Desarrollo de un modelo experimental en larvas de Bufo arenarum para la evaluación de la toxicidad de fotosensibilizadores

PAISIO, C; LOPEZ, V; BERTUZZI, M; RIVAROLA, V

Villa Gral Belgrano, Córdoba

Congreso; XIV Reunión Científica de la Soc. de Biología de Córdoba.; 2003

Sociedad de Biología de Córdoba

La terapia fotodinámica (PDT) es un tratamiento antineoplásico no convencional, en el que están involucrado la administración de un fotosensibilizador, el oxígeno y la luz visible. La iluminación del tumor excita al fotosensibilizador y provoca la liberación de oxígeno singlete, los cuales son responsables de la destrucción del tejido tratado. En nuestro laboratorio estamos abocados a la búsqueda de nuevos fotosensibilizadores más efectivos y menos tóxicos que los actuales. Es de gran importancia investigar la actividad tóxica de estos potenciales compuestos terapéuticos para conocer sus alcances y limitaciones. Estas propiedades pueden ser determinadas utilizando ensayos de toxicidad in vivo. El objetivo de este trabajo fue desarrollar un modelo experimental estandarizando un test de embriotoxicidad en larvas de anfibio, específicamente de Bufo arenarum. Se empleó una sustancia de reconocida actividad fotosensibilizadora como el azul de metileno, obteniéndose los valores de la LC 50 para esta molécula en condiciones de oscuridad e iluminadas. Se utilizaron larvas de Bufo arenarum obtenidas en nuestro laboratorio a partir de una fecundación in-vitro, en el estadío I. Las larvas fueron mantenidas a temperatura constante (22±2°C) en placas de Petri de 10 cm de diámetro con 40 ml de solución Ringer diluida (10 larvas por placa) y alimentadas con lechuga hervida. Cada experimento fue realizado por cuatriplicado y repetido una vez. Para obtener la LC50 en oscuridad se expusieron las larvas a distintas concentraciones de azul de metileno. Utilizando la máxima dosis no tóxica en oscuridad (mM) se realizó un ensayo de iluminación. Los resultados obtenidos muestran que la dosis de 706 m M corresponde a la LC50 en oscuridad y que la máxima dosis no tóxica en oscuridad, con un período de iluminación de 30 minutos logró matar al 98.3% de las larvas. Los estudios de malformación y embriotoxicidad están siendo analizados. En conclusión, 1: la combinación de azul de metileno y luz visible es la responsable de la muerte celular. 2: el modelo experimental desarrollado en nuestro laboratorio se adapta para la obtención de la LC 50 y para pruebas de embriotoxicidad con drogas fotosensibilizadoras y por lo tanto podrá ser utilizada con nuevos fotosensibilizadores estudiados en PDT.