Actividad de retrotransposones LINE-1 en la diferenciación neural. Efectos de desacetilasas de histonas y DNA metil-transferasas.

LUCIA REY ÁLVAREZ ; MARIANA SALCEDO ; ANDRÉS J ORQUEDA

Congreso; LX REUNIÓN DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE INVESTIGACIÓN CLÍNICA (SAIC) Y REUNIÓN ANUAL DE LA SOCIEDAD ARGENTINA DE FISIOLOGÍA (SAFIS); 2015

Los retrotransposones Long interspersed nuclear elements-1 (LINE-1) son elementos repetitivos que contienen dos marcos abiertos de lectura: ORF1 codifica una proteína de unión a RNA, y ORF2 codifica una retrotranscriptasa. La retrotransposición de estos elementos involucra un intermediario de RNA y tiene lugar durante el desarrollo embrionario temprano, en células germinales, células stem embrionarias y progenitores neurales del hipocampo; en células somáticas del cerebro, las inserciones en nuevos sitios del genoma conducirían al mosaicismo. Sin embargo, los mecanismos de control de la actividad de dichas secuencias no se conocen completamente. Los objetivos de este trabajo fueron determinar si la actividad de los elementos LINE-1 se ve alterada cuando células madre derivadas de tejido adiposo (hASC) o células de neuroblastomas humano (SH-SY5Y) y murino (N2A) son diferenciadas a células del tipo neural con ácido retinoico (RA), y evaluar la participación de desacetilasas de histonas (HDAC) y metil-transferasas de DNA (DNMT). En primer lugar, encontramos que el contenido relativo de DNA del ORF2 aumenta en células SH-SY5Y y hASC tratadas con RA, sugiriendo que nuevas inserciones de elementos LINE-1 ocurren durante la diferenciación neural. La inhibición de HDAC con tricostatina A (TSA) condujo a niveles aún superiores del contenido de ORF2 en células SH-SY5Y diferenciadas con RA, mientras que la inhibición de DNMT con 5-azacitidina (5AZA) no tuvo efectos sobre la TSA. Al analizar los niveles de RNA observamos, por un lado, que los LINE-1 se inducen en los tres tipos celulares tratados con RA; por otro, TSA incrementa los niveles de RNA en células SH-SY5Y sometidas o no a RA respecto a los controles sin tratar, mientras que TSA junto a 5AZA lo hacen en hASC y células N2A, diferenciadas con RA o no. Estos resultados sugieren que la retrotransposición de LINE-1 aumenta durante la diferenciación neural, y depende de los niveles globales de acetilación de histonas.