Activación de la pNPPasa del transportador de Ca2+ de membrana plasmática por Ca2+ y ATP.

RINALDI, D.E; ADAMO, H.

Buenos Aires

Congreso; Reunion Anual de la Sociedad Argentina de Biofísica; 2011

SAB

El transportador de Ca2+ de membranas plasmáticas humanas (PMCA), es una P-ATPasa autoinhibida que puede activarse por Ca-calmodulina, lípidos ácidos o proteólisis parcial. Al igual que otras ATPasas de tipo P, la PMCA puede hidrolizar ésteres fosfóricos no nucleotídicos como el p-nitrofenilfosfato. Esta actividad fosfatasa ha sido asociada con la conformación E2 de la enzima, en ausencia de Ca2+. De acuerdo con esta idea hemos mostrado recientemente que la actividad pNPPasa de la PMCA purificada de glóbulos rojos de cerdo es máxima en ausencia de Ca2+, y que el Ca2+ inhibe la act pNPPasa a través de la estabilización del confórmero E1 de la misma. Estudios previos han mostrado que el ATP puede rescatar a la enzima de la inhibición por Ca2+ forzando a la enzima a ciclar y alcanzar un nuevo estado estacionario en una conformación tipo E2. Hemos medido la actividad pNPPasa a altas concentraciones de ATP (3 mM) en función de la concentración de Ca2+. Cuando la enzima fue solubilizada en presencia de fosfatidilcolina (PC) la pNPPasa en ausencia de Ca2+ fue muy baja y aumentó con el incremento de las concentraciones de Ca2+. Sin embargo, si la enzima es solubilizada con lípidos ácidos la pNPPasa en ausencia de Ca2+ fue mayor que con PC y permaneció constante hasta aproximadamente 1 µM Ca2+ para luego decaer a concentraciones de Ca2+ mas altas. Por otro lado, hemos observado que cuando la enzima solubilizada en PC es activada por proteólisis parcial, la pNPPasa en ausencia de Ca2+ se incrementó 2.6 veces y mostró una dependencia con la concentración de Ca2+ similar a la observada en presencia de lípidos ácidos. Estos resultados sugieren que el aumento de pNPPasa de la enzima solubilizada con PC observado a concentraciones crecientes de Ca2+ está relacionado con la pérdida de la capacidad autoinhibidora del segmento C-terminal. Con subsidios de UBACyT, CONICET y ANPCyT.