Mapeo de las regiones proteicas del represor traduccional hSmaug1 involucradas en su localización a PB (Processing Bodies)

MARTÍN HABIF; GRACIELA LIDIA BOCCACCIO

FCEyN, UBA. Buenos Aires, Argentina.

Jornada; III Jornadas Departamentales del Departamento de Fisiología y Biología Molecular y Celular (FBMC), FCEyN, UBA.; 2008

Departamento de Fisiología y Biología Molecular y Celular (FBMC), FCEyN, UBA

Los Cuerpos de Procesamiento o P-Bodies (PBs) y los Gránulos de Estrés (SGs) son foci citoplasmáticos funcional y estructuralmente emparentados, en los cuales tiene lugar el silenciamiento de mRNAs. Mientras que los SGs contienen complejos de iniciación de la traducción arrestados y son inducidos de manera transitoria durante la respuesta a estrés, los PBs son constitutivos. En la formación de los PBs participan moléculas involucradas en el metabolismo del mRNA así como proteínas de unión a RNA las cuales median represión traducional. Nuestro grupo de trabajo caracterizó previamente a Smaug1 de mamíferos como una proteína con la capacidad de reprimir traduccionalmente transcriptos que poseen un motivo particular de RNA, el Smaug Recognition Element (SRE) (Baez and Boccaccio, JBC 2005). Asímismo, se describió la formación de foci citoplasmáticos de Smaug1 cuando ésta es transfectada en líneas celulares. En el presente trabajo, demostramos que alrededor del 82% de los foci de hSmaug1-ECFP colocalizan con el co-activador del decapping y marcador de PBs DCP1a. Más aún, los PBs se incrementan en aquellas células transfectadas con hSmaug1-ECFP. El 18% de los foci de hSmaug1-ECFP mostraron colocalización con el marcador de SGs TIA-1, el cual en determinadas condiciones experimentales es reclutado de manera moderada a PBs. Experimentos de knock-down por siRNA contra los componentes de PBs Hedls/Ge-1 o RCK/p54/Me31B/DDX6, los cuales son requeridos para conservar la integridad de los PBs, pusieron en evidencia la relevancia de estas proteínas en la formación de los foci de hSmaug1-ECFP. Por lo tanto, los foci de hSmaug1-ECFP resultan ser estructuras emparentadas con los PBs, donde la represión traduccional de transcriptos con estructuras SRE podría tener lugar.  La construcción de mutantes de deleción de hSmaug1 nos permitió caracterizar al dominio SAM de unión a RNA y a la porción N-terminal de la proteína como las regiones proteicas responsables de orientar la molécula a PBs. De manera adicional, ni el SAM ni la región N-terminal, de manera independiente, pudieron por su cuenta  ser reclutados a PBs. La sobre-expresión de construcciones con deleciones N-terminales produjo la desaparición casi completa de los PBs endógenos, sugiriendo que la región C-terminal de la proteína titularía uno o más componentes de PBs. Actualmente estamos investigando la relevancia de los componentes de PBs y las diferentes regiones de hSmaug1 en la represión traducional mediada por esta proteína. Supported by NIH (USA), University of Buenos Aires, CONICET and ANPCyT, (Argentina).