Estrategias para la optimización de inmunoensayos basados en SPR

M. A. DAZA MILLONE; C. Y. CHAIN; ALEJANDRO RAMIREZ; M. E. VELA

Buenos Aires

Workshop; WorkShop Fronteras en NanoBioTecnología: Del Laboratorio a la Empresa; 2017

Universidad Nacional de San Martín

La resonancia de plasmones superficiales (SPR) se ha incorporado como una técnica prometedora dentro de los formatos de inmunoensayos debido a que se pueden realizar ensayos simples, rápidos y sin marca para una gran variedad de analitos. Existen distintos desarrollos para la detección de proteínas, complejos conjugados, toxinas,alergenos, drogas y pesticidas, que pueden ser determinados directamente ya sea con el uso de anticuerpos o receptores sintéticos como elementos de sensado, contando con alta sensibilidad y, además, selectividad. Dentro de este amplio rango de moléculas, es posible alcanzar límites de detección entre 10-9 M hasta 10-13 M. sin embargo, paraalcanzar estas condiciones, es necesario optimizar distintos aspectos como: lafuncionalización de la superficie de oro, el reconocimiento molecular analito-recpetor y el uso de elementos para aumentar la sensibilidad. Por otra parte, es necesario disminuir las interacciones inespecíficas así como generar plataformas reutilizables y económicas.En este trabajo, se mostrarán las diferencias de las funcionalizaciones de la superficie de oro con monocapas de alcanotioles simples (ácido 11-mercaptoundecanoico, MUA) o mixtas (MUA/DTT) y con polímeros (polilisina, PLL) en cuanto a uniones inespecíficas y límites de detección. Sobre estas plataformas se inmovilizarán conjugados del analito o bien anticuerpos, para los cuales se analizaran distintas estrategias de unión medianteunión covalente, complejos (NTA-Ni2+) o uniones estreptavidina-biotina. Por último, se evaluará la amplificación de la señal mediante el uso de nanopartículas de oro (AuNPs) conjugadas con estreptavidina.