DESARROLLO DE TÉCNICAS COLORIMÉTRICAS PARA DETERMINAR LA VIABILIDAD IN VITRO DE TETRATIRIDIOS DE MESOCESTOIDES CORTI

FABBRI JULIA; ALBANI CLARA; PENSEL PATRICIA; ELISSONDO CELINA

Congreso; XXIV Congreso Latinoamerica de Parasitología; 2017

Para evaluar la viabilidad de los tetratiridios (TT) de Mesocestoides corti, el ensayo estándar consiste en la observación de la motilidad y la granularidad de los parásitos. El objetivo del trabajo fue desarrollar técnicas colorimétricas que permitan diferenciar entre TT vivos y muertos. Para ello se estudiaron los colorantes vitales eosina 0,05% y azul de metileno 0,01% y los colorantes fluorescentes ioduro de propidio (IP, 2μg/ml) y diacetato de fluoresceína (FDA, 0.5μg/ml). Inicialmente se trabajó con TT vivos y muertos por calor (24 h-65°C). Se los observó al microscopio de campo claro para determinar su viabilidad según su movimiento y granularidad y comparar con la viabilidad obtenida con las tinciones. Con eosina y azul de metileno se observaron los TT hasta las 2 h y a las 24 h. Con la tinción IP-FDA, los TT fueron observados a los 5 min. Una vez seleccionada la mejor técnica, ésta fue evaluada en un ensayo de viabilidad in vitro de larvas de M. corti incubadas con timol. Para ello, 50 TT fueron incubados en medio 199 a 37° C, en presencia de 250 y 50μg/ml de timol disuelto en DMSO. Se utilizaron como control TT incubadas en medio 199 con DMSO y TT muertas por calor. Se determinó viabilidad a las 24 y 48 h. Se pudo observar con azul de metileno que los TT vivos no tomaron el colorante, mientras que los muertos se observaron de color azul. Sin embargo, luego de 60 min, los TT vivos comenzaron a incorporar el colorante, observándose zonas azules. En cambio, a los pocos minutos de contacto con la eosina, los TT muertos se tiñeron de rosa, mientras que los TT vivos no tomaron el colorante, independientemente del tiempo transcurrido. Con la tinción IP-FDA, los TT vivos se observaron teñidos intensamente con FDA (verdes) y levemente con IP (rojo), ocurriendo lo opuesto con los TT muertos. Al evaluar la coloración con eosina, como técnica seleccionada, a las 24 h el control presentaba 100% de viabilidad, mientras que los TT muertos por calor tenían un 0%. En el tratamiento con timol50 se observó una viabilidad de 90.2%, mientras que en el tratamiento con timol250 todos los TT se encontraron muertos. A las 48 h, el control continuaba con 100% de TT vivos, mientras que con timol50 la viabilidad disminuyó a 87.3%. En conclusión, la técnica elegida para determinar la viabilidad de los TT de M. corti, porsu sencillez, bajo costo y fidelidad, es la tinción con eosina. Este procedimiento permite detectar la mortalidad de las larvas tanto por métodos físicos (calor) como por métodos químicos (fármacos).