Marcación de inmunoglobulinas con colorantes triazínicos: una alternativa simple y económica

ELIANA CELA; DANIEL H. GONZÁLEZ MAGLIO; MARIELA L. PAZ; FEDERICO S. WEILL; JULIANA LEONI; ALEJANDRO FERRARI

Mar del Plata, Argentina

Congreso; LVII Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Inmunología; 2009

Tradicionalmente, las técnicas inmunológicas de laboratorio utilizan anticuerpos marcados con enzimas, moléculas fluorescentes, ligandos radiactivos y oro coloidal. Esta última constituye la única forma de marcación utilizada en técnicas rápidas de diagnóstico, como el dot blot y la inmunocromatografía. Sin embargo, a pesar de su versatilidad, este método de marcación resulta costoso y laborioso, y en la actualidad no hay estrategias alternativas disponibles.El objetivo de este trabajo fue evaluar la factibilidad de marcar anticuerpos con un colorante triazínico (Red-HB120), por medio de un proceso sencillo y de bajo costo, para su uso en el diseño de técnicas rápidas de laboratorio.Este trabajo se llevó a cabo sobre un sistema conformado por un lisado de E. coli BL21 e inmunoglobulinas (Igs) de conejo específicas contra el lisado. Para optimizar la marcación, se ensayaron 3 condiciones de pH (8.25, 9.0 y 10.2) y 3 condiciones de tiempo de incubación (30, 60 y 120 min). En todos los casos, las Igs marcadas fueron separadas del colorante libre por exclusión molecular. Para cada una de las 9 combinaciones, se estudió: a) el grado de marcación, por medio de la relación de absortividad entre el colorante y las Igs (510/280 nm); b) la disminución del título de las Igs específicas, por ELISA, y c) la intensidad del color final, por dot blot. Los resultados mostraron que la marcación a pH 10.2 durante 120 min conduce a una mayor relación entre colorante e Igs. La titulación por ELISA indicó que, en estas condiciones, la inmunorreactividad de las Igs solo se ve levemente disminuida. A su vez, se comprobó que en esas condiciones de marcación, la intensidad de la coloración obtenida durante un ensayo de dot blot, es adecuada y máxima.Se concluye que la marcación de anticuerpos con colorantes triazínicos resulta una alternativa viable, económica y sencilla, para la obtención de reactivos de enorme utilidad en el diseño de técnicas rápidas de inmunodiagnóstico.