LA VÍA ALTERNATIVA DE AMPC/EPAC Y LA VÍA DE MAPK MEDIAN LA ESTIMULACIÓN DE LEPTINA POR HCG EN PLACENTA

J MAYMÓ; A PÉREZ PÉREZ; B MASKIN; JC CALVO; V SÁNCHEZ MARGALET; C VARONE

Mar Del Plata

Congreso; LVI Reunión Anual de la Sociedad Argentina de Investigación Clínica (SAIC); 2011

SAIC-SAFIS

La vía alternativa de AMPc/Epac y la vía de MAPK median la estimulación de leptina por hCG en placenta   Julieta L. Maymóa, Antonio Pérez Pérezb, Bernardo Maskinc Juan Carlos Calvoa, Víctor Sánchez-Margaletb y Cecilia L. Varonea aDepartamento de Química Biológica, Facultad de Ciencias Exactas y Naturales, Universidad de Buenos Aires, Buenos Aires, Argentina. bDepto. de Bioquímica Médica y Biología Molecular. Universidad de Sevilla, Sevilla, España. cHospital Nacional Alejandro Posadas, Buenos Aires, Argentina   La leptina (LEP) ha sido propuesta como una molécula fundamental en la regulación de la implantación y en el mantenimiento del embrión. Es una hormona de 16kDa descubierta en tejido adiposo con la función de regular el balance energético del organismo. También es expresada en placenta humana donde podría tener efectos sobre el crecimiento, la angiogénesis y la inmunomodulación. Hemos demostrado que el AMPc y la hCG inducen la expresión de leptina en células placentarias. En el presente trabajo, analizamos las vías de señalización y los mecanismos involucrados en la estimulación de leptina por hCG en trofoblastos humanos. Utilizamos como modelo de trabajo las líneas celulares trofoblásticas BeWo y JEG-3 así como explantos de placenta humana término. Por qRT-PCR confirmamos que el hCG (25-100 UI/ml) estimula la expresión de leptina en trofoblastos. Determinamos también que la hCG aumenta los niveles de AMPc y activa la transcripción a través de elementos CRE, evaluado por ensayos de gen reportero con plásmidos conteniendo el elemento CRE y el gen luc. Por qRT-PCR y por WB observamos que el AMPc inhibe el efecto estimulatorio de hCG sobre leptina. Previamente, demostramos que la estimulación de leptina por hCG en placenta era ejercida a través de la vía de la MAPK. Por WB y ensayos de gen reportero con plásmidos conteniendo el promotor de leptina y el gen luc, determinamos que la inhibición de la PKA con H89 10 µM no bloquea la estimulación de leptina por hCG. Más aún, la inhibición de PKA indujo significativamente la fosforilación de ERK 1/2, medida por WB. Finalmente, el tratamiento con un análogo del AMPc (8cpt-2me-cAMP, 10µM) que estimula la vía de Epac (sin estimular a la PKA), o la cotransfección con intermediarios de dicha vía, estimularon tanto la expresión basal de leptina como la inducida por hCG. En resumen, demostramos que la estimulación de leptina por hCG en placenta es independiente de PKA e involucra la vía de MAPK y la vía alternativa de AMPc/Epac.