DESARROLLO DE UN ENSAYO PARA EL TAMIZAJE MOLECULAR DEL VIRUS DE LA HEPATITIS B

PABLO E. CASAL; GERMÁN R. PÉREZ; ELISA M. BOLATTI; DIEGO CHOUHY; MIGUEL A. TABORDA; DANIELA GARDIOL; ADRIANA A. GIRI

Rosario

Congreso; XVI Congreso y XXXIV Reunión Anual de la Sociedad de Biología de Rosario; 2014

La transmisión de la infección por el virus de la hepatitis B (HBV) durante el período ventana serológico es una complicación transfusional de gran importancia. En países en desarrollo, los costos de los ensayos moleculares comerciales y la ausencia de desarrollos biotecnológicos regionales dificultan su aplicación en bancos de sangre. Nos propusimos desarrollar un ensayo de bajo costo para el tamizaje molecular de HBV, que incluya un control interno único (CIU). La metodología posee el siguiente formato: extracción de los ácidos nucleicos; amplificación mediante PCR multiplex (HBV y CIU) con cebadores biotinilados; hibridación de los amplicones en fase liquida a sondas específicas conjugadas a fluoresceina; captura de los híbridos a una microplaca revestida con estreptavidina; detección con anticuerpo anti-fluoresceina y un cromóforo; lectura del color. La técnica de PCR multiplex fue optimizada para la coamplificación de HBV y del CIU (fago P1). El límite de detección fue establecido en 15 copias/reacción utilizando plásmidos construidos en este trabajo. La sensibilidad y especificidad clínica del prototipo del ensayo aquí presentado se determinaron con un número discreto de muestras de plasma derivadas de pacientes con hepatitis B aguda, crónica y negativos. Los resultados preliminares indicaron que el ensayo puede discriminar los distintos estados de infección por HBV y de no infección. Asimismo, la inclusión del CIU permitió determinar la idoneidad de las muestras analizadas. Sin embargo, queda pendiente el análisis de un número significativo de muestras para realizar un estudio con significancia estadística a fin de determinar el desempeño del ensayo frente a diferentes estados de infección por HBV. La validación definitiva del método se realizará con el segundo Estándar Internacional de DNA de HBV, elaborado por la OMS, disponible en nuestro laboratorio. En conclusión, este ensayo provee un sistema sensible, específico y de bajo costo para evaluar su aplicación en el tamizaje molecular de donantes de sangre que concurren al ámbito público de la provincia de Santa Fe (Argentina).