Estrés oxidativo de placentas in vitro como mecanismo de infección de la enfermedad de Chagas congénito

TRIQUELL MARÍA FERNANDA; DÍAZ-LUJÁN CINTIA; ROMANINI MC; BOLATTI ELISA; MAZZUDULLI GINA; FRETES RICARDO E

Ciudad de León

Congreso; I Congreso Internacional en Anatomía, Histología, Genética, Biología Celular y del Desarrollo; 2008

Departamento de Ciencias Morfológicas de la Facultad de Ciencias Médicas de la Universidad Nacional Autónoma de Nicaragua

Una posible explicación para la baja incidencia de la enfermedad de Chagas congénito es que el conocido tripanosida, óxido nítrico (NO), es producido por la placenta el cual podría controlar la infección productiva en el tejido. El NO interactúa con ROS en la placenta, produciendo peroxinitrito, siendo detectado por localización inmunohistoquímica de Nitrotirosina, favoreciendo el estrés oxidativo. En nuestros trabajos se ha observado que hay una tendencia a la producción de NO por aumento en la expresión de e NOS, por lo que éste gas podría estar combinándose con ROS y formando peroxinitritos. Esto generaría alteraciones estructurales en la placenta lo que favorecería la transmisión del T. cruzi. Se propone analizar la producción de NO por tejido placentario en presencia del parásito, determinar el estrés oxidativo y establecer un posible mecanismo de infección. Mat y Met: Se obtuvieron 8 placentas humanas, de mujeres normales (38-40 semanas de gestación). Los explantos de vellosidades coriónicas se cultivaron en RPMI 1640 10% SBF por 24 hs. Los parásitos (trypomastigotes) provenían de la cepa Tulahuen y una cepa congénita (Lucky). Para cada una se realizaron co-cultivos con los explantos. Se procesaron las muestas para su tratamiento histológico (de rutina e inmunohistoquímica). La enzima eNOS y nitrotirosina se localizaron con anticuerpos específicos y se utilizó el sistema biotina-streptavidina-peroxidasa. Revelado con DAB. Con software Sigma scan se midieron las áreas de infección y amastigote por nido y áreas positivas para eNOS y nitrotirosina, como así también intensidad de marca. La expresión de la enzima eNOS fue evaluada por RT-PCR , sintetizando cDNA y luego realizando PCR con primers específicos para la enzima. Se normalizó con la enzima GADPH, midiendo la intensidad de la banda con Scion Image. La medición de nitritos se realizó con la técnica de Griess. Los datos obtenidos fueron analizados por ANOVA seguido del test post hoc de Bonferroni (p≤0,5). Conclusiones: Los niveles de NO de los medios de co-cultivo son deletéreos para el T.cruzi, pero no hay diferencias significativas entre ambos. En presencia de T. cruzi, la eNOS se ve aumentada, tanto su transcripción como su transducción. Las proteínas nitrosiladas estuvieron aumentadas en el aislado congénito, el cual es menos susceptible a los agentes deletéreos en el medio ambiente placentario.