Expresión de una enzima termofílica con actividad lipasa/fosfolipasa proveniente de la bacteria Thermus sp. 2.9.

LAURA E. NAVAS; ELIO M. ORTIZ; GRACIELA B. BENINTENDE; RUBÉN O. ZANDOMENI; MÓNICA FLORIN-CHRISTENSEN; MARCELO F. BERRETTA

Rosario, Santa Fe

Congreso; X Simposio Nacional de Biotecnología REDBIO 2015; 2015

En trabajos previos se llevó a cabo el aislamiento de bacterias de aguas termales de la provincia de Salta, una de las cuales corresponde a Thermus sp. 2.9, una bacteria termófila Gram negativa que presenta crecimiento óptimo a 70°C. También hemos obtenido la secuencia completa de su genoma permitiendo identificar numerosos genes codificantes de enzimas con posibles aplicaciones en la industria agroalimentaria. La disponibilidad de la secuencia nucleotídica y del ADN de la bacteria permite expresar genes seleccionados para el desarrollo de nuevas enzimas termoestables con aplicación industrial.En este trabajo se estudió el producto de expresión de un gen codificante de una enzima con similitud a fosfolipasas. En los organismos, estas enzimas cumplen un rol fundamental en el metabolismo y biosíntesis de fosfolípidos. En la industria alimentaria, se encuentran ejemplos de su utilización en el proceso de refinamiento de aceites vegetales, en la elaboración de productos lácteos, de panificación y emulsionantes. El gen se clonó y se expresó en forma inducible en E. coli. Las fracciones soluble e insoluble del lisado celular se analizaron por SDS-PAGE. Se observó una banda de proteína del peso molecular esperado de 27 kDa en ambas fracciones. Los experimentos se llevaron a cabo con la enzima presente en la fracción soluble, la cual fue purificada parcialmente. Se encontró actividad de fosfolipasa y de lipasa, a 55°C y pH 8, utilizando el sustrato natural asolectina, evidenciadas por cromatografía en capa fina (TLC). La temperatura óptima para la actividad lipolítica, determinada mediante espectrofotometría utilizando el sustrato colorimétrico p-nitrofenil palmitato, fue de 70°C, coincidiendo con la temperatura de crecimiento de la bacteria. La termoestabilidad de la enzima se estimó cuantificando la actividad remanente luego de incubarla a 70°C y se observó que retiene la totalidad de su actividad por al menos 8 horas.En conclusión, se logró la sobreexpresión de una enzima termofílica con actividad de fosfolipasa y de lipasa, que presenta alta termoestabilidad en comparación con enzimas homólogas de otros microorganismos termófilos, lo cual la hace interesante para avanzar en su utilización en procesos industriales de transformación de materia prima de origen agropecuario.